过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）

过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。

一、原理
过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可根据H₂O₂的消耗量或O₂的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H₂O₂的量。

二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：小麦叶片
（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H₂SO₄；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO₄（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H₂O₂市售30%H₂O₂大约等于17.6mol/L，取30%H₂O₂溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO₄溶液（在酸性条件下）进行标定；5. 0.1mol/L 草酸：称取优级纯H₂C₂O₄^.2H₂O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。

三、实验步骤
（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H₂O₂，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H₂SO₄2.5ml。
用0.1mol/L KMnO₄标准溶液滴定，至出现粉红色（在30min内不消失）为终点。

四、结果
酶活性用每g鲜重样品1min内分解H₂O₂的mg数表示：
过氧化氢酶活性（H₂O₂mg/g/min）＝（A－B）×V_T/(W×V_S×1.7×t)
式中：A对照KMnO₄滴定ml数；B酶反应后KMnO₄滴定ml数；VT提取酶液总量（ml）；VS反应时所用酶液量（ml）；W样品鲜重（g）；t反应时间（min）；
1.71ml0.1mol/L KMnO₄相当于1.7mgH₂O₂。