（一）试验动物的选择
常用的实验动物有兔、小白鼠、蟾蜍等。无论选用哪种动物，均须健康。一般地说，健康的哺乳动物毛色光泽、两眼明亮、眼和鼻无分泌物、鼻端潮而凉、反应灵活、食欲良好。健康的蛙或蟾蜍则皮肤湿润、喜欢活动，静止时后肢蹲坐、前肢支撑、头部和躯干挺起等。动物种类的选择需根据实验内容而定，使其解剖和生理特点适合于预定实验的要求。如：研究主动脉神经传入冲动的作用时，常选用兔作为实验对象，因为兔的主动脉神经在颈部自成一束，与迷走神经伴行，容易寻找和分离，在生理学的研究中，特别是基础理论研究中，合理地选择实验动物，常常是实验成败的关键，但并非越是高等动物越好。在选择实验动物时，应根据实验需要，因地制宜地加以考虑。
（二）动物的麻醉
在慢性实验或急性在体实验中，实行手术之前必须将动物麻醉。麻醉可使动物在手术或实验过程中减少疼痛，保持安静，保证实验的顺利进行。麻醉剂的种类繁多，作用原理不尽相同。除了麻痹中枢神经系统以外，还会引起其它生理机能的变化，因此，在应用时需根据动物的种类以及实验或手术的性质慎重选择。麻醉必须适度，过深或过浅均会给手术或实验带来不良影响。麻醉的深浅可从呼吸、某些反射的消失、肌肉的紧张程度和瞳孔的大小加以判断。人们常用刺激角膜以观察角膜反射、夹捏后肢股部肌肉等简易方法了解动物的麻醉状态，是呼吸深慢而平稳，角膜反射与运动反应消失，肌肉松弛。
1．常用麻醉剂的种类和用法
麻醉剂可分为局部麻醉剂和全身麻醉剂两种。局部麻醉剂0.5%-1.0%盐酸普鲁卡因或2%盐酸可卡因用作皮肤或黏膜表面麻醉。在生理学实验中，多采用全身麻醉剂，如发挥性的乙醚，非挥发性的巴比妥类、氨基甲酸乙酯等，以下分别加以介绍。
（1）乙醚 是一种呼吸性麻醉剂，适用于各种实验动物。在用乙醚麻醉兔或鼠类时，可将动物放在特制的玻璃钟罩内，同时放入渗有乙醚的脱脂棉，动物在吸入后的15-20min开始发挥作用。
乙醚对呼吸道有刺激黏液分泌的作用，为防止呼吸道堵塞，可用硫酸阿托品（0.1-0.3mg/kg体重）皮下或肌肉注射。乙醚麻醉又易于掌握、比较安全和作用时间短等优点，但麻醉后也容易苏醒，需要专人管理麻醉，以防止过早苏醒或麻醉过量。
（2）戊巴比妥钠 适用于各类实验动物。常配制成5%的水溶液。一般由静脉或腹腔注射。戊巴比妥钠作用开始快，一次给药的麻醉有效时间约2-4h，不需要特殊护理。如在实验中需要补充注射时，可再由静脉注射1/5剂量，仍可维持1-2h。麻醉过量时，动物可产生严重的呼吸和循环抑制而导致死亡。
（3）氨基甲酸乙酯 又称乌拉坦或脲脂。氨基甲酸乙酯易溶于水，常用浓度为20%-25%，适用于多数动物，多用静脉注射或腹腔注射，蛙类用皮下淋巴囊注射。
表1．动物常用麻醉药物的剂量及作用特点
2．麻醉剂的给药途径及方法
挥发性麻醉剂的用药途径为吸入麻醉，用于全身麻醉；非挥发性麻醉剂的给药途径主要为注射给药法，可进行静脉、腹腔、肌肉、皮下注射，适用于全身麻醉，局部用药适用于局部麻醉。分述如下：
（1）静脉注射：兔的静脉注射常用部位为耳缘静脉。兔耳的外缘血管为静脉，中央的血管为动脉。注射前最好将动物放入兔体固定箱内，使兔头露于箱外，以防注射时挣扎。先除去注射部位的被毛，用左手食指和中指夹住耳缘静脉近心端，使其充血（亦可用动脉夹夹住），并用左手拇指和无名指固定兔耳。用右手持注射器将针头顺血管方向刺入静脉（图），刺入后再将左手食指和中指移至针头处，协同拇指将针头固定于静脉内，便可缓缓注射。如注射阻力过大或局部肿胀，说明针头未刺入血管，应拔出重新刺入。首次注射应从静脉的远心端开始，以便进行反复注射。
（2）腹腔注射：常用腹腔注射麻醉鼠类、兔、蛙类等在腹腔注射鼠类时，要注意安全。对小白鼠可采取手持法进行注射（如图），即用左手小指和无名指将鼠尾夹住，迅速用其他三指抓住鼠耳及颈部皮肤，使其腹部朝上，右手将注射针头刺入下腹部腹白线稍外侧处，注射针与皮肤面呈45°夹角，若针尖通过腹肌后抵抗消失，应保持针头不动，轻轻注入麻醉剂。腹腔注射应防止把针头刺入肠、肝、膀胱等内脏器官，因此针头刺入后须轻轻回抽，如无肠内容物、尿液或血液被抽出，表明针头为刺入内脏。
（3）肌肉注射：注射部位多为胸肌，或腓肠肌等肌肉较发达的部位。兔多选用两侧臀部或股部进行肌肉注射。固定动物后，右手持注射器，使之与肌肉呈60°夹角，一次刺入肌肉。注射完毕后用手轻轻按摩注射部位，帮助药液吸收。
（4）皮下注射：在注射麻醉剂中并不常用。小白鼠的皮下注射通常在背部皮下，可将皮肤拉起，注射针刺入皮下。将针头轻轻向左右摇摆，容易摆动则表明已刺入皮下，然后注射药物。拔针时，可以用手指轻捏注射部位，以防药液外漏。对大白鼠、兔等可选用背部、大腿内侧或臀部等皮下脂肪较少的部位进行皮下注射。
（5）局部麻醉：在用药局部可逆性地阻断感觉神经冲动的发出和传导，在动物意识清醒状态下用药，使其局部感觉消失。一般在用药几分钟内起效，维持1h左右。依实验要求可进行局部浸润、表面麻醉和阻断麻醉。
（三）动物的固定
急性在体实验的手术过程中，必须将麻醉动物稳定地加以固定，以限制动物的活动，保证实验或手术的顺利进行。一般使用各种动物的头夹和固定绑带将动物固定于手术台上，但随手术部位和实验内容的差别，动物的固定方法也不相同。生理学实验中最常使用的动物固定方法有两种：背位（仰卧位）固定法和腹位（俯卧位）固定法，其中关键性的固定部位是头部和四肢。
1．背位（仰卧位）固定法 将动物的背部直接接触手术台的固定方法。在呼吸、循环、消化及泌尿等实验中均采用此法。各类哺乳动物的背位固定法大同小异，现以兔为代表加以说明。
头部的固定：头部的固定通常使用头部固定夹（图），使用时可将相应的头夹固定于手术台前段的直棒上，然后将以麻醉的动物背位置于手术台上，兔头的固定是将兔头夹的半圆铁圈由背部夹持于动物的颈部，然后将金属圆铁圈适度地套紧兔嘴，旋紧螺丝，加以固定（图），但不可过分压迫鼻部，以免影响呼吸。
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