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常规病理标本的制作程序

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 　本站论坛

1.不能作为单一的固定剂。冰醋酸在实际应用中，常被作为添加剂来使用，如许多种固定液，都加入了冰醋酸。另外，在苏木素和伊红染液中，也常加入了冰醋酸。
2.不能凝固蛋白质，不能保存白细胞颗粒，红细胞及含血铁黄素等。
3.价格较贵。

(4) 重铬酸钾是一种固体，粉末状，桔红色，具有毒性，较难溶解于凉水，因此在配制时用较高温度的水来溶解，也较易发生沉淀。它的优点是：
1.能固定脂肪及类脂物。
2.为髓鞘及嗜铬细胞优良的媒染剂。
3. 可配成多种的混合固定液
（1）Helly氏液
重铬酸钾 25g
升汞 50g
蒸馏水 1000ml
甲醛 50ml
临用时加入甲醛，因其加入后于24小时后可发生沉淀而失效，因用时应特别注意。
该液是白细胞颗粒的优良固定剂，因此凡为白细胞或造血器官如骨髓，脾脏及患先天性梅毒之肝脏等，可用此液固定。
此液原配方要求加入硫酸钠，但据我们经验认为，硫酸钠在液中对组织无任何作用，故省去。
（2）.Orth氏液
重铬酸钾 20g
蒸馏水 1000ml
甲醛 100ml
该液固定组织较缓慢，不适合于作临床的活检固定液，4毫米厚的组织固定时间需36-72小时，该液对于染色质的固定好，显示清晰，但可溶解部分红细胞和含铁血黄素。
重铬酸钾的不足之处有：
1.不能沉淀蛋白质，它必须和醋酸配成混合固定液，方能发挥作用，产生铬酸，沉淀蛋白质。
2.具有毒性及产生高温。在配制液体时，如清洗剂，当加入硫酸时，可产生很高的温度，并挥发出刺鼻的气体，应特别注意。
3、.它不能长期固定组织，经它固定的组织应充分水洗后保存于80%酒精中。
（六）氯化汞又称升汞，具有毒性。单独用于固定组织，对组织有较大的收缩力，故很少单独使用。它可使组织蛋白凝固，迅速硬化而形成白色硬膜，这是由于它穿透力极弱所致，因此它不适合固定较厚的组织。它常与其它的试剂配成混合固定液，彼此抵消各自存在的不足，使固定组织的效果非常好。应用升汞配成的固定液的优点有：
1.细胞核及细胞浆染色清晰。
2.对白细胞颗粒，造血器官如骨髓和脾脏等是优良的固定剂。
3.可配成许多混合固定液如：Zenker氏、Helly氏和Stieve氏等。
它的不足之处是：
1. 容易产生汞盐沉淀。经升汞配成的混合固定液固定的组织，一是不能固定太长时间，经24h后冲水，然后保存于70%或80%的酒精中，二是在洗色前，都必须用碘除去汞盐的沉淀，以免由于汞盐沉淀在切片上而影响对切片的观察。
2. 对组织有较大的收缩力且穿透力弱，用它不能固定过厚的组织，因穿透力弱，组织中间部分固定不好。
3.具有毒性。
（七）、微波辐射固定组织。
组织固定的结果是组织中的蛋白质凝固，以保存组织中原有的微细结构。常规固定用的是甲醛或酒精等。但是这些固定剂从某些方面来说其穿透力不很强，因而需要较长时间的固定，另者，临床上的冰冻切片，有的应用快速加热法预先固定组织，造成福尔马林的极度挥发，污染环境，影响人们的身体健康，因此寻找其它固定组织的方法就成为研究的重点。微波辐射固定组织，就是在这种情况下产生的。
微波是一种具有能量的电磁波，在其运动期间可产生瞬间热。由于微波的快速运动，也导致了物体内部极性分子的快速运动，产生了热量，致使组织蛋白凝固，因此，旧的叫法称微辐射固定组织。按实际的应称为微波辐射凝固蛋白。
1.组织固定温度和时间的选择。
究竟微波产生的热量需要多高，才级使蛋白凝固的呢：Masson氏等人的研究表明，700-90℃，对没有固定的蛋白可发生变性。Bernard经过一系列的研究后认为，肝、肾、肺的最佳固定温度是70℃，和77℃，因为各种组织的结构不同，成分不一，电子密度不一样，因而固定所需要的温度也不样。我们的实验认为，65℃左右的温度可适合于各种组织，条件是固定取小块材料，时间在截取3-4min。
2.微波炉档次的选择
目前市售微波炉品种繁多，要选用合适的微波炉，必须根据各人的使用习惯和爱好。微波炉一般分为高火、中火及低火。使用时要进行系列实验。例如多少ml的固定液需要多少时间达到多少温度，用的是哪一档次的火等。
3.微波辐射需固定液的选择
张素娟等应用临床活检新鲜组织如：甲状腺、乳腺和淋巴结，实验小鼠的肿瘤、肝脏、肾脏、心和肺等组织，分别用10%的福尔马林和生理盐水经微波辐射后，通过HE、网染、AB-PAS以及几种抗体如CEA、EMA和L26等的检测后发现，生理盐水的结果最好。
一提固定，以往总与福尔马林分不开，而经微波辐射后的固定效果，竟然比前者好，这就解决了一大难题，即快速石蜡切片及冰冻切片的组织固定，以往用加热固定的方法，其结果导致福尔马林蒸发，使整个房间都充满福尔马林气味，既污染了环境，也影响了身体的健康。虽然生理盐水用微波辐射后对组织有良好的固定效果，但是它只能适合于少量的快速制片和某些研究，绝不可能适合于大批量的活检。因为活检取材，现目前组织的制作，都基本上用机器来进行，而所用的脱水盒，有铜和不锈刚的金属物所制成，组织取材后，一个一个的盒子装着组织，如果除去金属来用微波固定，这是不现实的事情。另外，微波辐射，它的穿透力较弱，大量的组织块，其中间是达不到要求的。

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