网站地图本站论坛
高级搜索收藏本站
当前位置:试验方案>动植物>生理试验> 正文
  • 病理制片程序

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-04-09    本站论坛

⑦切片脱水用的100%alc也可设置两个缸,根据实际情况使用。
⑧碳酸后所设置的三个缸为二甲苯,目的是使切彻底得到透明,当然两个缸也可以,但效果没有三个缸的好。
⑨切片经一个程序完结后,搁置在所设置的二甲苯最后一缸,如没有去妄动它,它将永远不起来。
3.酒精灯加温快速染色法及步骤
该法可用于临床快速冰冻切片,快速石蜡及某些快速诊断的切片。它不象常规染色法那样,各种步骤都需要一定的时间。快速染色不但要求要快,而且染色质量要好,否则将给诊断造成困难。
①所有切片包括冰冻切片和石蜡切片都须用电吹风吹,使切片附贴牢固。石蜡切片还须经过快速脱蜡,切片经电吹风吹一定时间后约(1min左右),即刻浸入二甲苯,此可见成片的石蜡溶解于二甲苯中,取出切片再用电吹风吹,然后再浸入二甲苯,如此反复2-3次,石蜡即脱干净,酒精洗后,继用电吹风吹干。
②用滴管滴染苏木素染液于切片上,在酒精灯上加热染色。加热时要来回移动切片,不要在一个点上加热,否则染色不均匀,一点加热的地方容易将切片掀起来,导致切片脱离载片。当加热的苏木素染液有蒸汽出现时,即可停止染色(时间约为30sec-1min)。
③倾去余液,急洗,速分化,水洗。将切片浸入70℃左右的热水中返蓝约30sec-1min。
④速染伊红,切片浸入伊红液即可,后速往下酒精至切片封固,整个染色过程约4min左右,其结果与常规法同。
4.超声波快速染色法及步骤
①切片处理同3法①。
②用一小烧杯,将入苏木素染液,浸入超声波的工作范围内,开动超声波计时表30sec,染色即可完成。
③取出切片,速水洗,分化,浸入热水或于超声波工作范围内超声20sec,速染伊红直至封片。
结果同常规染色法
两种快速染色法染色时的注意事项:
①切片要附贴牢固,薄切片是很重要的,如果切片过厚,加热染色时,切片容易翻起脱离载片,导致染色失败。
②超声波快速染色原理见(超声波快速石蜡制作程序)。
(十)苏木素的种类及其配制法
苏木素是一种天然染料,它的获得是从苏木素的树心提炼而成的,市售略带浅褐色结晶,易溶于酒精和甘油,较难溶于水,需加热才能溶解。苏木素产生于墨西哥的坎佩切,国内使用的几乎都为进口。
苏木素作为单一的染色是不行的,它染色力弱,必须具备两个条件才能具有强的染色力。一是产生有效成分苏木红,二是加入媒染剂。苏木红的产生需经氧化才能获得,获得苏木红有两种方法,一是天然成熟,苏木素与其它试剂混合好后,暴露于阳光或亮处,在自然光的作用下,慢慢地氧化成熟,但时间较长,一般需四周左右。二是加入化学试剂促进成熟,如加入黄色氧化汞或碘酸钠促使苏木素成熟。快速成熟的苏木素溶液有的可马上使用如Mayer氏苏木素,有的则需隔天使用。
苏木素种类较多,用法各异,有的用于常规染色,有的则用于特殊染色。
(1)明矾苏木素
1.Harris氏苏木素(1990)
苏木素 2.5g
无水酒精 25ml
硫酸铝钾(钾明矾) 50g
或硫酸铝铵(铵明矾)
蒸馏水 500ml
黄色氧化汞 1.25g
冰醋酸 20ml
该溶液为当前最广泛使用的染液,由于它染色时间短,效果好,很受使用者的欢迎。

 


 


配制时,先将苏木素溶于酒精(平时也可将苏木素以10%的浓度溶解好,贮存备用),取一2000ml的三角烧瓶,倾入钾明矾,加入蒸馏水,于电炉上加热,熔解钾明矾,完全熔解后,待温度至90℃左右时,加入预先溶解好的酒精苏木素,继续加热至沸腾,延续3-5min,此时溶液逐渐加深,变为紫红色,拔离电源,加入黄色氧化汞,当充分氧化后,重新插上电源继续加热3-5min,此时溶液变深紫色,拔去电源,直接将三角烧瓶插入预先备好的冰水里,放于暗处,第二天过滤后加入冰醋酸,即可使用三个月,但据我们的实践及多年的经验认为,只要掌握好切片的“无水化”,该染液可反复使用达一年之久(天天使用)。
注意事项:
①苏木素一定要预先溶解,否则较难彻底溶解。
②加入黄色氧化汞后,可产生大量的气泡,因此,配制500ml的溶液,一定要选择2000ml以上的容器,否则液体便会溢出。
③当溶液变为深紫色后,应终止氧化,烧瓶应直接插入冰水中,不要担心玻璃瓶会爆裂,因三角烧瓶经特殊处理的,不会有爆裂的危险,如果有,那是属于产品质量问题。迅速冷却的主要目的是不让溶液过度氧化,以免缩短溶液的使用寿命。
④溶液过滤后方加入冰醋酸,不要颠倒过来,加入冰醋酸后再过滤,如果这样,过滤速度将非常慢,这是因为醋酸会使滤纸中的纤维膨胀,增加了密度,使溶液不易通过,导致过滤时间延长。
⑤该苏木素在使用一段时间后,可以在表面产生金属膜。当出现这种现象时,可用粗滤纸捞去,否则贴于切片上将较难除去。
⑥苏木素加入冰醋酸后,其PH值在2-2.28之间。
2.Mayer苏木素(1903)
苏木素 0.1g
蒸馏水 100ml
硫酸铝钾 5g
柠檬酸 0.1g
水合氯醛 5g
碘酸钠 20mg
该试剂有的单位用作常规切片的染色,用它染核不会过染,时间可在20min至30min,核染色质清晰可见,核呈灰黑色,可用作特殊染色核的对比染色试剂。如颗先用天青石蓝为媒染剂,染色时间可在2-3分钟完成。
配制溶液时,先将蒸馏水稍加温,加入苏木素并不停搅拌直至完全溶解,继而加入硫酸铝钾,令其充分溶解后,加入柠檬酸和水合氯醛,继续搅拌均匀,全部溶解后再加入碘酸钠,搅拌均匀,此时溶液的颜色变为深棕色,过滤后即可使用。
3.Ehrlich氏苏木素(1886)
苏木素 1g
无水酒精 50ml
甘油 50ml
硫酸铝钾 7.5g
蒸馏水 50ml
冰醋酸 5ml
将苏木素溶于无水酒精里,硫酸铝钾溶于蒸馏水中,然后所有的试剂都加在一起,充分搅拌均匀后,放于窗台上阳光充足的地,让其慢慢氧化成熟,大约需四个星期,才可使用。该液 量种很好的细胞核染色液,用它染后,细胞核染色清晰,不易过染。对于用酸脱钙组织细胞核的染色,该试剂优于其它各种苏木素。这种自然氧化成熟的苏木素,可长期使用,不会变质。但染色时间较长,需要20分钟以上。
如需急用而苏木素又未成熟时,该液可加入20-30mg的碘酸钠,以促使其迅速氧化成熟,但这试剂配成后,就不是原来的苏木素,不能长期使用,但起码可用半年左右。

上一篇:组织标本收集取材固定   下一篇:生理学实验动物的抓取和固定方法

共9页: 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 7 [8] [9] 下一页

推荐文章
 
相关文章
推荐专题
 

↑返回顶部   打印本页   关闭窗口↓  
 本站申明 联系我们 网站地图
Copyright© 试验方案

Powered by DedeCms email:htmyth#yahoo.com.cn

Optimized to 1024x768 to Firefox,Opera and MS-IE6