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各种组织特殊染色法—基底膜的显示

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 　本站论坛

（一）基底膜的结构
基底膜一般是由纤维的结缔组织，粘多糖和蛋白质所构成，电镜可分为三层，即中间层（电子密度较高的致密层）内层和外层（电子密度较低疏松层）。基底膜内主要含有IV形胶原蛋白，蛋白多糖和层粘连蛋白，这些物质的存在，给显示基底膜提供了物质基础。
（二）显色的方法
1．六胺银法（Hexamine silver）
Jones六胺银染色法的改良法[5]
I．试剂的配制：
A液：3%乌铬托品（hexamine）
B液：5%硝酸银
C液：5%四硼酸钠（Sodium tetraborate）
II．工作液的配制：
取A液12.5ml，加入B液2.5ml，混合在一起，此时可出现乳白色，搅拌片剂，即可消失，再加入2.5ml的C液，再加入12.5ml的蒸馏水，即可使用。
操作方法：
①切片脱蜡至水。
②1%的过碘酸氧化切片10min。
③自来水洗，继入蒸馏水洗。
④入工作液于60℃60~90min，于50℃120~180min
⑤蒸馏水洗。
⑥用0.2%的氯化金水溶液调色1min。
⑦自来水洗，蒸馏水洗。
⑧5%硫代硫酸钠固定5min。
⑨自来水流1~2min.
⑩用1%淡绿复染30secd。
⑾脱水，透明，封固。
结果：基底膜呈出深黑色，背景呈现绿色。
2．AFOG法
试剂的配制：取苯胺蓝（aniline blue）0.5克溶于100ml的蒸馏水中，煮沸后冷却，再加入桔黄G1克，酸性品红1.5克，用HCC校正pH至1.9，即可使用。
①切片脱蜡至水
②AFOG液染色5min
③自来水洗，95%脱水多采染色
④脱水，透明，封固。
结果：基底膜，胶原纤维显示不同程度的蓝色，红白球及背景呈桔黄色，管型蛋白呈鲜红色。
（三）该法的主要特点：
在一张切片上既可看到深黑色的基底膜和鲜红色的沉淀蛋白，又可看到蓝色的结缔组织，给予某些疾病的诊断和鉴别带来了方便。
（四）临床应用：
① 可以观察各种疾病的进展和损害程度。
② 对膜性肾病可显示增厚的基底膜。
③ 可以观察某些肿瘤突破基底膜的情况。
④ 可以对某些疾病作出预后的判断。
⑤可用于卡氏肺囊虫肺炎的诊断。
（五）注意事项
① 如应用于基底膜的染色，应在切片脱蜡后用苦味酸进行媒染。
② 切片浸染时间从染液达60℃算起。
③浸染应以基底膜染色合适为标准。
④浸染液一次性使用。
⑤ 所用的常备液应于4℃冰箱中存放。
⑥ 一切器皿须清洁液浸泡。
在六胺银液中的浸染，可用微波加热法。在银液中的浸染时间为1分钟左右。

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