各种组织特殊染色法—弹性纤维染色
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  • 各种组织特殊染色法—弹性纤维染色

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-04-09    本站论坛

弹性纤维主要由弹性蛋白(一种黄色硬蛋白,它是黄色弹性纤维组织的主要成分,干燥时易脆,而湿润时呈弯曲并富弹性)构成。它广泛分布于全身的各个部位,尤以循环系统,呼吸系统和皮肤系统为甚。新鲜时它呈黄色,固又称为黄色纤维。弹性纤维较细,直径0.2-1.0um,有分支,不成束。但可交织成网。它富有弹性,容易拉长,但不能拉到超过它的极限,外力除去后又恢复原状。弹性纤维与胶原纤维交织在一起,在HE染色的标本上,含量少时不易与胶原纤维区别,含量多时呈折光性强的淡粉红色。由弹性蛋白构成弹性纤维的鞘,并非完全的密封,在其周围有许多微细孔,这些微细孔可作为营养物及排除废物的场所。
弹性纤维主要来源于带有平滑肌特征的间胚叶细胞,少量可由脉管的内皮细胞产生,先形成前——弹性蛋白(pro-elastin),这时在电镜下可见到直径为200nm的电子密度微纤维,在成熟的弹性纤维蛋白,电密度减少或丧失,较为均匀一致。
弹性纤维与胶原纤维,网状纤维不同,它极难容于有机或无机的溶液里。
(一)弹性纤维的变形和病理变化
随着年龄的增长,特别是到了老年的时候,弹性纤维可发生生理性的变化,这时可观察到弹性纤维的纵行分裂,断成碎片,最后成为颗粒,这些变化同时也伴有化学变化,氨基酸和钙的含量有所增加,这些变化在皮肤是最明显的。当有病变的时候,我们便可在切片观察到有的弹性纤维增生,有的被破坏,断裂、崩解,失去弹性。如主动脉瘤,就可见到瘤壁上的弹性纤维已经失去了弹性。这是由于主动脉壁的弹性纤维受到内压的不断冲击,弹性纤维过度牵拉,超过它的极期,再也恢复不了原状,因此在切片标本上(特殊染色)只能见到其痕迹或反应物。
(二)弹性纤维的染色方法
1.Weigert氏雷锁辛品红法(1898)(Weigerts resorcin-fuchsin method)试剂的配制:
Wergert氏雷锁辛品红液:
碱性品红 2g
雷锁辛 4g
蒸馏水 200ml
30%三氯化铁 25ml
取500ml的烧瓶加入蒸馏水和雷锁辛,用玻棒搅拌均匀,加热直至沸腾,持续1-2min,再加入30%的三氯化铁水溶液继续搅拌直至煮沸2-3min后,此时溶液的颜色变为紫罗蓝色,冷却后过滤。倒去滤液,将滤纸和沉淀物一起放入烤箱中一起烤干。取200ml95%酒精,将滤纸与沉淀物一起放入加热溶解,除去滤纸,冷却后过滤,用95%酒精凑足200ml,再加入4mlHCL。即可使用,保存于4℃冰箱,可长期使用。
操作方法:
⑴切片脱蜡至水,
⑵0.5%高锰酸钾水溶液氧化5min,
⑶水洗,
⑷2%草酸漂白1-2min,
⑸水洗,
⑹入95%酒精,
⑺入Weigert氏雷锁辛液,室温染1-2h,
⑻95%酒精分化至背景清晰为止,
⑼Van Giesson氏液或核固红作对比染色,
⑽脱水透明,封固。
结果:弹性纤维:深蓝或深黑色,其余成分视用何种对比染色而定。
该法特点:
①可将微细弹性纤维显示出来。
②方法可靠,颜色鲜红色,切片可保存。
③配制好的染液可使用较长时间。
注意事项:
①1908年H art应用该法,将1%HCl酒精稀释了Weigert氏原液。即原液5-20ml。酸酒精30-40ml。结果弹性纤维显示蓝色——黑色。
②1929年French改良了这种方法,用Weigert氏原液中的2g品红,改为1g结晶紫。结果弹性纤维显示深蓝——绿色。
③1929年Sheridan改良了该法,Weigert氏原液中的2g品红改用为2g结晶紫。结果弹性纤维显示为绿色。
④在溶化沉淀物时,应隔水溶化,不要直接于明火上加热熔解。
⑤配制后的染液用小磨口瓶装,以防溶液挥发,影响染色效果。
⑥该溶液虽可保存较长时间,但仍以新鲜配制为好。
⑦切片在透明时,有人提出切片不要经过苯酚二甲苯。其原因之一是对已染色的切片有影响。



2.Gomori’s醛品红法(1950)(Gomrori’s aldehyde-fuchsin method)
(1) 该法特点:
①可把较细的弹性纤维给予显示出来。
②它不但染弹性纤维,也可染胰腺的B细胞,肥大细胞,神经细胞的尼氏小体,表面肝炎抗原(HBsAg)粘蛋白等。
③方法可靠安全,操作得当,可获满意结果。
④颜色鲜艳,利于摄影。
(3)试剂的配制:
碱性品红 1g
70%酒精 98ml
三聚乙醛 1ml
浓盐酸 1ml
将品红溶于酒精里,再加入HCl和三聚乙醛,混合后于室温放置2-3天后即可成熟,保存于4℃冰箱内,使用期1-2个月。
(3)操作方法:
①切片脱蜡至水,
②0.5%高锰酸钾水溶液氧化5min,
③水洗,
④2%草酸漂白1-2min,
⑤水洗,
⑥入70%酒精稍浸泡1min,
⑦入染液中浸染10-15min,
⑧70%酒精分化,至无余色脱下为止,
⑨0.5%橙黄G做对比染色,20-30s,
⑩脱水,透明,封固。
结果:弹性纤维深蓝色,背景不同程度的黄色。
注意事项:
1醛品红液在成熟之后方可使用,染色最佳时间一般在7-10天,
2分化时应随时观察切片,防止褪色过度,可改用95%酒精为分化剂。
3.地衣红技术(Unna.1891)
(orcein techique)
(1)染液:
地衣红 1g
70%酒精 99ml
浓HCL 1ml
将地衣红溶于酒精中,也可以用水浴锅加热以助其溶解,冷却过滤后加入HCL于室温放置1-2天。
(2)操作方法:
①切片脱蜡至70%酒精,
②入上述染液中浸染3h(室温)或1-2h(37℃)
③0%酒精分化,
④脱水,透明,封固。
结果:弹性纤维棕红色或深棕色。
4.Verhoff氏酒精苏木素技术(1908)
(Verhoff’s alcoholic hematoxylin ted)
(1)染液的配制:
A. 5%酒精苏木素.
B. 10%三氯化铁水溶液.
C.lugol’s碘.
溶2g碘片于少数的蒸馏水中,再溶1g的碘化钾,两者总量为100ml。



(2)操作方法:
①切片脱蜡至水,
②用上述染液(A.2分,B.4分,C.4分)染色10-15min,
③水洗,2%的三氯化铁分化至弹性纤维清晰为止,
④水洗,95%酒精除去沉淀于切片的碘,
⑤水洗,用Van Giesson或中性红作对比染色,
⑥脱水,透明,封固。
结果:弹性纤维黑色,背景据不同的对比染色而定。

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