心脏灌流

［实验目的］
　　1.学习（蛙、鱼）离体心脏灌流方法。
　　2.观察Na 、K 、Ca ² .H 、肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
［实验原理］
　　心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（如Na 、K 、Ca² 等的浓度及比例、pH值和温度），而内环境的变化则直接影响到心脏的正常节律性活动。在体心脏还受交感神经和迷走神经的双重支配，交感神经末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导速度加快，心率加快；迷走神经末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢。将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的理化环境中（如任氏液），在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。而改变任氏液的组成成分，离体心脏的活动就会受到影响。
［实验对象］
　　蛙或黄鳝（其它鱼类也可）
［实验药品］
　　任氏液、0.65％NaCl、2％CaCl₂、1％KCl、3%乳酸、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰胆碱等
　　若用鱼类心脏做实验对象，灌流液需用鱼类的生理盐水（介绍两种）：
　　① jaeger(1965):
　　NaCl 6.0 g, KCl 0.12 g, CaCl₂ 0.14 g ,NaHCO₃ 0.2 g ,NaH₂PO₄·2H₂O 0.01 g,葡萄糖 2 g, 加蒸镏水至 1 L。
　　②山本（1949,适用于鯔、鲤、鯽等）
NaCl 0.75%, KCl 0.02%, CaCl₂ 0.02 %, NaHCO₃ 0.002%。
［仪器与器械］
　　计算机生物信号采集与处理系统（或二道生理记录仪）、张力换能器、蛙类常用手术器械一套、玻璃分针、蛙板、蛙钉、蛙心插管、蛙心夹、试管夹、滴管（7支）、试剂瓶（7个）、烧杯、双凹夹、万能支架、细线。
　　若采用黄鳝为实验动物，还需：细钢丝、木板条、纱布。
［实验方法与步骤］
　　1.标本的制备
　　（1）离体蛙心标本制备（斯氏蛙心插管法） 取蟾蜍一只，按实验5.4中介绍的方法打开胸腔，暴露心脏。在主动脉干下方穿双线，一条在左主动脉上端结扎作插管时牵引用；另一根在动脉球上方打一活结备用（用以结扎和固定插管）。
　　玻璃分针将心脏向前翻转,在心脏背侧找到静脉窦,在静脉窦以外的地方做一结扎(切忽扎住静脉窦),以阻止血液继续回流心脏（也可不进行此操作）。
　　图7.3-1 插管进入心室示意图
　　左手提起左主动脉上方的结扎线，右手持眼科剪在左主动脉根部（动脉球前端）沿向心方向剪一斜口，将盛有少许任氏液、大小适宜的蛙心插管由此开口处轻轻插入动脉球。当插管尖端到达动脉球基部时，应将插管稍向后退(因主动脉内有螺旋瓣会阻碍插管前进)，并将插管尾端稍向右主动脉方向及腹侧面倾斜，使插管尖端向动脉球的背部后方及心尖方向推进，在心室收缩时经主动脉瓣进入心室（见图7.3-1）。注意插管不可插得过深，插管的斜面应朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵住。
　　若插管中任氏液面随心室的收缩而上下波动，则表明插管进入心室，可将动脉球上已准备好的松结扎紧，并固定于插管侧面的钩上，以免蛙心插管滑出心室。剪断结扎线上方的血管，轻轻提起插管和心脏，在左右肺静脉和前后腔静脉下引一细线并结扎（参考图5.4-1），于结扎线外侧剪去所有相连的组织则得到离体蛙心。此步操作中应注意静脉窦不受损伤并与心脏连结良好。最后，用任氏液反复换洗插管内的任氏液，直到插管中无残留血液为止。此时，离体蛙心标本制备成功，可供实验。
　　(2)离体黄鳝心脏标本制备
　　以鱼类为实验材料，一般采用黄鳝（其它鱼类离体心脏标本制做见实验7.2）。
　　①按实验7.2的方法，暴露黄鳝的心脏。在动脉球下方穿两根线(图7.3-2)。
　　一根在腹主动脉上结扎并留下线头，便于剪动脉球和插管时有一支撑点。另一根线打一活结备用。