组织DNA的提取和纯化
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组织DNA的提取和纯化

点击：   作者：   来源：  时间： 2007-03-06 　本站论坛
[原理]
本法用含EDTA的溶液洗涤细胞，SDS（十二烷基硫酸钠）破碎、裂解细胞，消化蛋白质，使核蛋白解聚并使细胞内的DNA酶失活，用酚、氯仿变性蛋白质并去除杂质，最后用乙醇沉淀得到纯化的DNA。

[试剂]
1. 裂解缓冲液
2.苯酚-氯仿溶液
3.氯仿-异戊醇溶液
4.冰无水乙醇及70%乙醇
5.TE缓冲液
6.5mol/L NaCl

[操作]
1.处死小白鼠一只，取新鲜肝脏，用生理盐水清洗去血水。
2.每克组织加10ml裂解液制成匀浆。
3.取2ml匀浆于离心管中，加等体积苯酚-氯仿溶液，加盖，缓缓来回颠倒5min，
离心2500rpm×10min。
4.取上层水相，加等体积氯仿-异戊醇溶液，加盖，缓缓来回颠倒5min，离心
2500rpm×10min。
5.取上层水相至玻璃管内，加5mol/L NaCl至终浓度为0.3mol/L（2ml 100ul，3ml 150ul）。
6.加2.5倍体积的冰无水乙醇，加盖，缓慢摇匀，见白色絮状沉淀DNA出现。
7.用玻棒捞起DNA沉淀置于试管中，用1mLTE溶解。
8.定量
吸取DNA溶液100ul 2.9mlTE（30倍稀释），在260nm和280nm下读
取吸光度值，
9.计算
DNA浓度（ug/ml）=A260nm×50×1/光径×稀释倍数

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