动植物样品的采集及DNA样品的提取

淀蛋白质和多糖（Dellaporta 等1983；Galau 等1988；Hughes，Galau 1988）。此方法不需要有机提取，而且快速，所以对大量样品比较合适。
1．材料
提取缓冲液：100mmol／dm３ Tris-HCI，pH 值8．0；50mmol／dm３EDTA，pH 值8．0；500mmol／dm３ NaCl；2％SDS（w／v）；l％PVP-360（w／v）；0．1％β-巯基乙醇（体积比），用之前在通风橱中加。
2．步骤
（1）用液氮在研钵中研磨1．0g 新鲜叶子，可以加一些石英砂帮助研磨。将研磨完毕的粉末贮存在－80℃冰箱中，在加提取液之前，不要让植物材料融化。
（2）在冰冻的组织中加 6ml 提取缓冲液，转到一个15ml 的离心管中，充分振荡大约30 秒钟，使之混合均匀，然后在65℃下放置20 分钟。
（3）往管中加入2ml 5mol／dm^３乙酸钾（pH 值6．5），充分摇匀，在冰水中放置5 分钟。随着不溶的十二烷基硫酸钾的沉淀，大部分蛋白质和多糖作为复合物被除去了。
（4）在 4℃下 2 000r／min 离心 20 分钟。
（5）吸出上清液，将其倒入一个干净的 15ml 的离心管中，不要带入颗粒物质，然后加 4ml 异丙醇轻轻混合，在－20℃下放置。
（6）在4℃下 2 000r／min 离心 15 秒钟，DNA 沉淀后，轻轻地倒掉上清液，在纸巾上倒扣10 分钟或更长时间，以干燥沉淀物。
（7）将沉淀物放在 100TE 中溶解，然后将溶液倒入一个1．sml 离心管中，离心 5分钟，移去不溶的沉淀。
（8）将管中上清液倒入另一个 1．5ml 离心管中，加 75μl 3mol／dm３ NaAc（pH 值 7．6）和500μl 冷异丙醇，充分混合，在—20℃下放置1～2 小时，拿出后再在室温下放10 秒钟，使管中DNA 沉淀。
（9）用 500μl 80％乙醇洗沉淀物 10 分钟，离心 1 分钟，干燥沉淀物 10 分钟。
（10）根据DNA 沉淀物的大小，用少量的 TE（10～100μl）溶解DNA。
7．3．3 氯化铯方法
这个方法的原理是根据在氯化铯（CsCl）中的不同密度梯度来分离细胞成分。此方法可以产生大量高纯度的DNA，但费时，而且需昂贵的仪器设备，对需要复杂的有机提取或沉淀的材料比较适合（Carr，Griffith 1987；Weeks 等 1986）。在一些情况下，它可能是在含大量次级产物的植物中提取高质量DNA 的唯一方法。DNA 可以在一个平衡的CsCl 梯度中通过与以下几个染料中的一个结合而被纯化， 这几个染料为溴化乙锭（ Ethidium bromide）、Bisbenzimicle、碘化丙锭（propidium iodide）、Bisbenzimide，它们不同的浮力密度对分离不同的染色体组特别有用。
7．3．4 PCR 小量制备法
此方法的优点是一次可以提纯很多样品，比较快速，而且小于10mg（50mm）的新鲜叶子材料就可以产生足够的DNA，产生的DNA 对杂交实验是可用的（Millgan 1992）。这个方法存在的问题是DNA 沉淀物可能不够紧密，或不一定能形成一紧密的DNA 沉淀。
1. 材料
分离缓冲液：200 mmol／dm３Tris-HCI，pH 值 8．0；250 mmol／dm^３NaCI；25 mmol／dm^３EDTA；
0．5 ％ SDS。
2．步骤
（1）用1．5ml 离心管研磨小的组织样品。可取管口大小的新鲜叶子（＜10mg），冻在液氮中
的叶子也可用。
（2）在研碎的样品中加 400μl 的分离缓冲液，用适合的速度涡旋 10 秒钟，以分散开样品。
（3）在室温下将1．5ml 离心管中样品离心 12～15 分钟，沉淀细胞内物质。
（4）搜集300μl 的上清液，弃去沉淀。
（5）在上清液中加300μl 预冷异丙醇，倒转样品1～3 次，使之充分混合，在室温下至少放
置5 分钟。
（6）将微离心管中的样品在室温下离心20 分钟，以搜集沉淀的DNA。
（7）弃去上清液，用300μl 80％的乙醇室温下沉淀 10 分钟。
（8）室温下离心样品12 分钟，弃去上清液。
（9）用300μl 80％的乙醇再洗后，室温下离心 5 分钟，弃去上清液。
（10）室温下干燥样品1 小时或将样品放过夜。
（11）用 100μl TE 悬浮样品。