实验证明，这种改良的CTAB抽提法适用于山茶属植物叶片DNA抽提，提取的DNA量大，质量也较好，能满足RAPD和其它分子生物学分析的要求.
为了提高DNA的纯度和得率，建议选用较幼嫩的叶片，因为处于延伸生长期的植物细胞果胶含量较少.在抽提过程中，发现不同种其抽提效果及DNA得率也有较大的差异，东兴金花茶DNA得率最高可达110 μg/g，而红皮糙果茶的得率却只有12 μg/g，这可能是由于不同种其叶片中酚类和脂类等杂质含量差别较大，从而影响到DNA抽提过程中DNA的得率.
3.2 实验中应注意的问题
对于DNA的纯化要达到以下3点要求：（1）DNA样品中不应存在有对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；采用改良的CTAB法，利用氯仿、异戊醇可去除有机溶剂，而EDTA可以螯合二价金属离子；（2）应将其它生物大分子，如蛋白质、多糖、脂类分子降低到最低程度，我们通过延长离心时间，增加氯仿-异戊醇的抽提次数，可使杂质量降到最低；（3）排除其它核酸分子的污染，可通过加入RNaseA，将混在DNA中的RNA降解掉.
为了保证分离核酸分子的完整性和纯度，在实验过程中还应注意：（1）尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏；（2）减少化学因素对核酸的降解，为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作须在pH值为4～10的条件下进行；（3）减少物理因素对DNA的降解，将DNA溶于TE液中于4℃保存，TE液中的EDTA可螯合二价金属离子以抑制DNA酶的活性，TE的pH值为8，可减少DNA的脱氨反应，在这种条件下DNA可保存5 a以上［5］.
*国家自然科学基金课题“山茶属植物的分子分类与鉴定”的部分内容。课题编号：39570603
作者简介：谭晓风，男，博士，教授。
作者单位：中南林学院经济林育种与栽培国家林业局重点实验室，湖南株洲市，412006
参 考 文 献
1 谭晓风. 银杏RAPD遗传图谱的构建及主要栽培品种和雌雄株的分子鉴别：［学位论文］. 株洲：中南林学院，1997
2 邹喻平，汪小全，雷一丁，等. 几种濒危植物及其近缘类群总DNA的提取与鉴定.植物学报，1994，36：528～533
3 苏应娟，王艇. 陆均松不同居群的RAPD分析.中山大学学报，1999，38（1）：98～101
4 罗春清，谭晓风，漆龙霖.山茶属植物分类综述.中南林学院学报，1999，19(3)：78～81
5 J 萨姆布鲁克，E F 弗里奇，T曼尼阿蒂斯. 分子克隆操作指南.第二版.北京： 科学出版社，1992 上一篇：质粒DNA提取实验常见问题解答 下一篇：植物基因组DNA的分离
共2页: 上一页 [1] 2 下一页
