一、目的: 了解质粒抽提常用的方法和原理;掌握试剂盒制备质粒DNA 的法。 二、原理: (一)质粒DNA 制备三个步骤: 1、细菌培养与质粒扩增 2、菌体收集和溶菌 3、质粒DNA分离 (二)方法介绍: 1、碱变性抽提法(SDS法):主要是利用染色体DNA和质粒DNA碱性环境中变性
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载体质粒的抽提、纯化及检测

点击:   作者:   来源:  时间: 2007-03-07  本站论坛

8.将DNA-prep Tube置于2-ml Microfuge Tube中,将步骤4 中的上清加入DNA-prep Tube 中,5,500rpm 离心1m。
9.弃滤液,将DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中,加入500ul BufferW1,5,500rpm 离心1m。
10.弃滤液,将DNA-prep Tube 置回到原2-ml Microfuge Tube 中,加入500ul
BufferW2,5,500rpm离心1m。重复一次。
11.弃滤液,将DNA-prep Tube 置回到原2-ml Microfuge Tube 中,12,000rpm 离心2m,去除Silica 膜上残余的试剂。
12.将DNA-prep Tube 置于一洁净的1.5ml EP 管中,在Silica 膜中央加60ul Eluent,室温静置2m,12,000rpm 离心1m,洗脱质粒DNA。

四、质粒DNA 的琼脂糖凝胶检测
(一)仪器
冰箱 高速离心机 琼脂糖凝胶电泳系统 凝胶成像仪或紫外检测仪
(二)器皿
微量取样器 离心管 Eppendorf管
(三)试剂
(同实验一的琼脂糖凝胶电泳试剂)
(四)实验步骤
配好琼脂糖凝胶(0.8%),取5 微升含有质粒DNA 的洗脱样品和Mark 分别点样,检测质粒DNA 的纯度和浓度。
五、结果分析
从电泳图谱上,观察所抽提到的质粒DNA 的纯度和浓度。

 


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