功能基因筛选方法的研究进展

相对简便,结果可重复,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需去除血清

磷酸钙法

磷酸钙-DNA 复合物吸附于细胞膜,被细胞内吞稳定转染,

瞬时转染

操作简便,但重复性差,不适用于原代细胞及某些培养细胞

阳离子脂质体法

带正电的脂质体与带负电的核酸磷酸骨架形成复合物,被细胞内吞

稳定转染

瞬时转染,

适用于所有细胞,转染效率高,重复性好,但转染时需去除血清,转染效果随细胞类型变化大

非脂质体脂类法

内含多种脂质成分,与DNA 结合后转运到细胞内

瞬时转染稳定转染

适用于所有细胞,包括许多原代培养细胞;转染效率高,细胞毒性小,转染时可以不去除血清

逆转录病毒介导法

通过感染宿主细胞将外源基因整合到染色体中

稳定转染

可用于难转染的细胞,如原代细胞、体内细胞等。但携带基因不能太大,操作复杂,耗时,需考虑安全因素。

腺病毒介导法

通过感染宿主细胞将外源基因整合到染色体中

瞬时转染特定宿主细胞

可用于难转染的细胞,需考虑安全因素

电穿孔法

高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA 通过膜上形成的小孔导入

稳定转染,

瞬时转染

,适用于所有细胞,但细胞致死率高,DNA 和细胞用量大,需根据不同细胞类型优化实验条件

基因枪法将

DNA 用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置射入细胞,DNA 在胞内逐步释放、表达

瞬时转染