使用15 U ThermoScript™或者 200 U Thermo-X™RT,在存在poly(A)-tailed RNA ladder,oligo (dT)20和γ32P dCTP时,在50℃到70℃下进行RT反应。反应产物在1.2%的碱性琼脂糖凝胶中分离,通过放射自显影观察。
图6-Thermo-X™反转录酶超越了其它竞争者
使用10ng到100ngHeLa细胞总RNA和基因特异引物RT反应,按照生产商的说明书,在60℃或者70℃进行RT反应。使用Platinum® PCR SuperMix High Fidelity和所示的引物对,以1kb/min进行35个循环的PCR反应。
附加信息来源
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参考文献
1.Kotewicz,M.L.et al.(1988)Nucleic Acids Research 16(1):265-277.
2.DeStefano,J.J.et al.(1994)Biochimica et Biophysica Acta 1219(2):380-388.
3.Potter,J.,Zheng,W.,and Lee J.(2003)Focus 25(1): 19-24.
4.Harrison,G.P.et al.(1998)Nucleic Acids Research 26(14):3433-3442.
5.Wu,W.et al.(1996)Journal of Virology 70(10):7132-7142.
6.Myers,T.W.&Gelfand,D.H.(1991)Biochemistry 30(31):7661-7666.