网站地图	本站论坛
高级搜索	收藏本站

热门关键字：　细胞培养　 pcr 　琼脂糖凝胶电泳　质粒DNA的提取　凝胶加样缓冲液　 PCR inventor

	当前位置：试验方案>核酸试验>PCR>RT-PCR> 正文

RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-03-07 　本站论坛

材料：
（1）急性期病人血清、鼠肺、鼠血或分离的汉坦病毒
（2）引物：

引物	序列（5’～3’）	位置	片段（bp）
逆转录引物	TAGTAGTAGACTCC	1~14	LMS
通用外引物	AAAGTAGGTGITAYATCYTIACAATGTGG	1910~1939	M( )
	GTACAICCTGTRCCIACCCC	2373~2354	M(-)
型特异性引物
汉滩病毒	GAATCGATACTGTGGGCTGCAAGTGC	1958~1984	M( )
	GGATTAGAACCCCAGCTCGTCTC	2318~2340	M(－)
汉城病毒	GTGGACTCTTCTTCTCATTATT	1936~1957	M( )
	TGGGCAATCTGGGGGGTTGCATG	2331~2353	M(－)
S片段引物	ATGTTGCCTGGGGIAAAGAGG	1200~1220	S( )
	GCGCACTAGTAGTAGTAGACTCCCTAAAGA	1670~1696	S(-)

方法：
（1）病毒RNA的提取：采用TRIzol按说明提取，制备模板RNA；
（2）逆转录、合成cDNA：采用SuperScripTMII或AMV逆转录酶，按说明书进行；
（3）PCR扩增：反应条件为95℃预变性10分钟，94℃60秒、55℃60秒、72℃45秒、扩增30～35个循环，72℃延伸12分钟。
（4）扩增产物用1～2％琼脂糖凝胶电泳鉴定。若条带的分子量与预期片段大小相同，则表明为特异性扩增产物。
必要时，可进行：
（5）PCR片段的回收和核苷酸序列测定：切下特异分子量条带，用QIAquick凝胶回收试剂盒回收（按其说明书进行），自动测序仪测序。

意义：扩增到特异性条带可确诊汉坦病毒并明确其型别，序列测定还可以对汉坦病毒的变异情况进行研究。

上一篇：mRNA差别显示技术[DDRT-PCR] 下一篇：RT-PCR实验方法大全

·mRNA差别显示技术[DDRT-PCR]
·RT-PCR实验方法大全
·SMART技术回顾
·原位聚合酶链式反应与原位反转录聚合酶链式
·PCR与RT-PCR技术
·实时定量RT-PCR检测急性白血病患者中WT1表
·RT-PCR lab
·RT-PCR常见问题分析及其解决方案
·RT-PCR (Reverse transcription PCR)
·反转录PCR （RT—PCR, Reversed Transcript
·mRNA差别显示技术[差示反转录PCR]
·Gene-specific RT-PCR
·差示反转录PCR[mRNA差异显示技术]
·Rt-PCR实验步骤
·Two Step REAL TIME RT-PCR PROTOCOL
·RT-PCR简介
·Avoiding DNA Contamination in RT-PCR
·RT-PCR引物的选择
·提高RT-PCR的灵敏度与产物长度

推荐专题

↑返回顶部打印本页关闭窗口↓

　本站申明

　联系我们

Optimized to 1024x768 to Firefox,Opera and MS-IE6