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RT-PCR一步法同两步法的比较

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-10-24 　本站论坛

两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品时易于操作，有助于减少残余污染，因为在cDNA合成和扩增之间不需要打开管盖。一步法可以得到更高的灵敏度，最低可以达到0.1pg总RNA，这是因为整个cDNA样品都被扩增。对于成功的一步法RT-PCR，一般使用反义的基因特异性引物起始cDNA合成。

一步法

两步法

起始第一链cDNA合成使用：

起始第一链合成使用

Oligo(dT)

GSP引物

随机六聚体

GSP引物

优点

优点

•灵活

•方便

引物选择

扩增酶同逆转录酶预先混合

扩增酶的选择

转管步骤少，减少污染可能性

•困难RT-PCR的优化能力

•高灵敏度

同Platinum®酶结合提高特异性

•适用于大量样品分析

同Platinum Pfx Taq DNA聚合酶结合提高忠实性

•适用于定量PCR

•适用于在单个样品中检测几个mRNA

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