HLA基因分型方法:PCR-SSCP法
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  • HLA基因分型方法:PCR-SSCP法

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2006-11-06    本站论坛

PCRSSCP

1)提取DNA

同前RFLP法

 

2)PCR扩增

同前PCR-RFLP,也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。

 

3)非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

1.取PCR的扩增产物,加凝胶加样液3μl,95℃加热变性2min,冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍,加样3μl。

2.取样品用微量加样器加入非变性聚丙烯酰胺凝胶样品孔中,200V电泳过夜。

 

4)放射自显影

1.未掺入同位素的PCR产物电泳后,取出凝胶床,撬去粘附的玻璃板,将凝胶浸在固定液中15min。

2.用0.2% AgNO3浸泡10min,用去离子水冲洗。

3.在显色液中显影,直到获得满意效果。将显色好的凝胶转贴到滤纸上,照相分析结果。


[1]



 


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