实验目的
通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。
实验原理
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。
在待扩增的DNA片断两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。
PCR技术的原理
1.变性：在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，称之为变性。
2.退火：是模板与引物的复性。引物是与模板某区序列互补的一小段DNA片段。
3.延伸：从结合在特定DNA模板上的引物为出发点，将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按5’→3’的方向沿着模板顺序合成新的DNA链。
PCR反应的温度循环周期
PCR 反应的每一个温度循环周期都是由DNA变性、引物退火和反应延伸三个步骤完成的。
图中设定的反应参数是94℃变性1min， 60 ℃退火1min， 72 ℃延伸1.5min。
如此周而复始，重复进行，直至扩增产物的数量满足实验需求为止。
一般PCR反应条件
实验仪器
实验材料1、DNA模板
2、4种dNTP
3、引物1、引物2
4、Taq酶
5、琼脂糖
6、DNA相对分子质量标准物
7、吸头、50ul PCR管
试剂10×PCR缓冲液(含Mg
2＋)
4×dNTP (每种1mmol)
Tag酶 1U/ul
DNA模板
引物1: 5`- GGGGAATTCATGGTGAGCAAGGGC-3`
引物2: 5`-GACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC-3`
引物溶液浓度 10pmol/ul
实验步骤1在0.5ml RCR管内配置20ul反应体系：
PCR反应程序
(1) 94℃变性5min，
(2) 94℃变性1min，
(3) 52 ℃退火1min，
(4) 72 ℃延伸1min。
(5) 重复(2)-(4)30次
（6）72 ℃延伸1min。
实验结果
PCR结果。1、对照(无模板)；2－6、PCR产物（5ul样品）
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