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扩增曲线
 原始数据
 Spectra:各波长的原始信号

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实时定量故障排除

 没有标准曲线

 没有标准曲线
 没有扩增曲线
原始数据只有1个循环 Spectra
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只有1个循环的数据原因:
1.收集数据的步骤只有一个循环,只收集了一个数据点
2.电脑为了节省电源而休眠,通讯中断,1个循环后的数据丢失
原因1:PCR参数设置错误
原因2:硬盘休眠
 基线下滑

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从原始数据找原因
从第1-第9个循环,ROX的信号升高并逐渐下降。
在所设定的4-13基线范围内,ROX信号值是变化的,而FAM的信号值基本上是固定的,经过FAM/ROX的校正后,比值自然不相等,所以基线不是水平的直线,而有下滑部分。
ROX的信号变化与所用试剂的质量有关。
应该取10-20为合理的基线范围。

解决方法 修改基线范围为10-20,重新分析。
 重新分析的结果 基线范围取10-20,重新分析后的图谱。 第1-9循环的信号为负数,由于试剂质量引起。
 增曲线分成两段扩增曲线断裂

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原因:基线的终点大于CT值,
通常是因为模板DNA浓度偏高,CT值< 15,而基线仍然取3-15,
其中包含部分扩增信号,导致标准偏差偏大,阈值过高
解决方法:减小基线终点,至CT值前4个循环,重新分析数据
样品浓度跨度太大
 直线扩增曲线 原因:探针部分降解
V形扩增曲线
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