–TaqMan
TM–TaqManMGB
–Dual-oligoFRET pairs
–分子信标(Molecular beacons)
–ScorpionsTM/AmplifluorTM
1、TaqMan探针
TaqMan探针定量原理
共振能量转移
荧光共振能量转移(FRET)
当某个荧光基团的发射谱与另一个荧光基团的吸收光谱重叠，且两个基团距离足够近时，能量可以从短波长（高能量）的荧光基团传递到长波长（低能量）的荧光基团.
这个过程称为荧光共振能量转移(FRET),实际相当于短波长荧光基团释放的荧光被屏蔽。
2、TaqManMGB探针
MGB探针能够分辨1个碱基的差别
完全配对，有信号
一个碱基不配对，没有信号
TaqManMGB探针原理
MGB探针的优势
–提高信噪比
–没有背景荧光
–更高的淬灭效率 |
–提高Tm值15 mer 提高18°C
–探针更短只要13-19个碱基
–更多一重PCR– |
两种探针比较
Cycle Number
ΔTm决定探针杂交特异性
C•ΔTm = Tm配对-Tm不配对
•要有效地区分等位基因，退火/延伸温度必须落在ΔTm区间内
3、分子信标(Molecular beacon)TaqMan
探针的衍生形式
4、杂交双探针
TaqMan探针的衍生形式
探针法小结
既灵敏又特异：PCR与分子杂交的结合
双倍放大：PCR放大与荧光放大的结合
•4种探针相比较，你更倾向于使用哪种？
SYBR Green I染料法
SYBR Green I是一种DNA小沟结合染料
SYBR Green I荧光染料
在PCR过程中染料与DNA结合发光
染料法小结
成本低
不需要探针
上一篇：The Polymerase Chain Reaction(PCR) 下一篇：PCR[polymerase chain reaction]技术总论
共4页: 上一页 [1] 2 [3] [4] 下一页
