多聚酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR技术，是80年代中期发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术。此法操作简便， 可在短时间内在试管中获得数百万个特异的目的DNA序列的拷贝，PCR技术虽然问世仅数年时间， 但它已迅速渗透到分子生物学的各个领域，引起了生物技术发展的一次革命.
目前它在分子克隆， 目的基础检测，遗传病的基因诊断，法医学，考古学等方面得到了广泛的应用。
Polymerase: DNA聚合酶
PCR技术的创建
Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。 1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。
1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术
1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。
三篇重要论文
The Unusual Origin of the Polymerase Chain Reaction (Scientific American, 1990,262(4):56-61, 64-5 )
Primer-directed Enzymatic Amplification of DNA with a Thermostable DNA Polymerase (Science,1988,239(4839):487-91 )
Specific Synthesis of DNA In Vitro via a Polymerase Catalyzed Chain Reaction (Methods in Enzymology, 1987,155:335-50 )
PCR技术诞生所依赖的社会需求和研究需要
基因组DNA文库
从基因组文库中筛选目的基因
DNA克隆
PCR技术的原理 1 PCR技术的基本原理
无细胞分子克隆法：
在微量离心管中,加入适量的缓冲液, 微量的模板DNA,四种脱氧单核苷酸,耐热性多聚酶, 一对合成DNA的引物,通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环。
每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍; 扩增了特异区段的DNA带。
PCR原理
Sample denaturatation
Primer annealing
Primer extension
PCR product
PCR反应曲线
标准的PCR反应体系
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 10～100pmol
模板DNA 0.1～2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg
2 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
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