引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的
合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高
PCR反应的特异性决定因素
引物与模板DNA特异正确的结合;
碱基配对原则;
Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
靶基因的特异性与保守性
2.灵敏度高
PCR 产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克 ( pg=10-12 ) 量级的起始待测模板扩增到微克( ug=10-6)水平
从 100 万个细胞中检出一个靶细胞
在病毒的检测中,PCR 的灵敏度可达 3 个RFU (空斑形成单位)
在细菌学中最小检出率为3个细菌
3.简便、快速
PCR反应用耐高温的 Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA 扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广
4.对标本的纯度要求低
不需分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总 RNA 均可作为扩增模板
可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等粗制的DNA扩增检测
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