提高PCR特异性的策略
四种策略
1.巢式PCR（Nest-PCR）
2.递减PCR（TouchDown PCR）
–前几个循环使用严谨的退火条件提高特异性。
–循环设在比估算的Tm高大约5℃的退火温度下开始，然后每个循环降低1-2℃,直到退火温度低于Tm 5℃。
–特异性最高的目的模板会被优先扩增，这些产物在随后的循环中继续扩增占据优势。
–递减PCR对于那些不了解引物和目的模板同源性程度的方法更为有用，如AFLP、DNA指纹分析等。
3.热启动PCR（HotStart PCR）
–热启动主要是通过抑制一种基本成分延迟DNA合成，直到PCR 仪达到变性温度
–通常选择热启动Taq酶
–热启动PCR是除了好的引物设计之外，提高PCR特异性最重要的方法之一
4.使用PCR增强剂
–甲酰胺，DMSO，甘油，甜菜碱等
–可能的机理：降低熔解温度，有助于引物退火，辅助DNA聚合酶延伸通过二级结构区
–增强剂浓度要适当
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