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热门关键字：　细胞培养　 pcr 　琼脂糖凝胶电泳　质粒DNA的提取　凝胶加样缓冲液　 PCR inventor

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PCR扩增产物的分析

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-10-27 　本站论坛

PCR产物是否为特异性扩增，其结果是否准确可靠，必须对其进行严格的分析与鉴定，才能得出正确的结论。PCR产物的分析，可依据研究对象和目的不同而采用不同的分析方法。
1. 凝胶电泳分析：PCR产物电泳，EB溴乙锭染色紫外灯下观察，初步判断产物的特异性。PCR产物片段的大小应与预计的一致，特别是多重PCR，应用多对引物，其产物片段都应符合预计的大小，这是起码条件。
1、琼脂糖凝胶电泳：通常应用1～2%的琼脂糖凝胶，供检测用。
2、聚丙烯酰胺凝胶电泳：6～10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好，条带比较集中，可用于科研及检测分析。
　　聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好，其分辩力很高，甚至相差1bp的DNA段也能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳的制备和操作比琼脂糖凝胶复杂。
2. 酶切分析：根据PCR产物中限制性内切酶的位点，用相应的那切酶进行酶切，经电泳分离后，获得预期大小的片段，此法既能进行PCR产物的鉴定，又能对靶基因分型，还能进行变异性研究。
3. 分子杂交：分子杂交是检测PCR产物特异性的有力证据，也是检测PCR 产物碱基突变的有效方法。
4. Southern印迹杂交：在两引物之间另合成一条寡核苷酸链(内部寡核苷酸),经标记后作为探针，与PCR产物杂交。此法既可作特异性鉴定，又可以提高检测PCR产物的灵敏度。
5. 斑点杂交：将PCR产物点在硝酸纤维素膜或尼膜薄膜上，再用内部寡核苷酸探针杂交，无阳性反应斑点，主要用于PCR产物特异性鉴定及变异分析。
6. 核酸序列分析（测序）：是检测PCR产物特异性的最可靠方法。

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