RNA的制备与分析对于了解基因在转录水平上的表达与调控和c
DNA的合成都是必须的，
RNA的纯度和完整性对于Northern blot，RT-
PCR和c
DNA文库的构建等分子生物学实验都至关重要。
RNA分离的方法很多，其中最关键的因素是尽量减少
RNA酶的污染
实验原理：Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总
RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成分的同时保持
RNA的完整性。在氯仿抽提、离心分离后，
RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀
RNA。
用这种方法得到的总
RNA中蛋白质和
DNA污染很少，可以用来做Northern,RT-
PCR,分离m
RNA，体外翻译和分子
克隆等。
实验步骤： 1.液氮研磨样植物叶片，每1.5ml tube分装0.1克样品；
2.每管加1毫升Trizol 试剂（样品体积不超过Trizol 试剂体积的10％），迅速混匀（若样品较多可先将混好的样品置于冰上）；室温下净置5－10分钟以利于核酸蛋白质复合体的解离；
7.弃上清，加1ml 75％乙醇清洗
RNA，振荡片刻后（务必使沉淀悬浮起来，以确保洗涤干净），7500×g 离心5分钟，小心弃上清；
8.室温静置5－15分，使
RNA沉淀恰好干燥，加入20 µl DEPC水溶解，取2 µl 琼脂糖
电泳检测
RNA质量。采用分光光度计测定
RNA浓度，将样品保存于-70 ℃超低温冰箱中备用。
注意事项： 抽提及操作
RNA中要谨防RNase的污染，因此操作
RNA的试剂及器皿都要进行相应的处理。
RNase-free water：Draw water to RNase-free glass bottles. Add diethylpyrocarbonate （DEPC）to 0.01% . Let stand overnight and autoclave.
研钵处理：0.4N NaOH 浸泡过夜，DEPC水洗涤3遍；
应戴口罩和手套，环境洁净；玻璃器皿180ºC烘烤3hrs以上；塑料制品DEPC水清洗，蛋白质变性剂处理；一次性用品如tube，tip等用新的，高温高压消毒。
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