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热门关键字：　细胞培养　 pcr 　琼脂糖凝胶电泳　质粒DNA的提取　凝胶加样缓冲液　 PCR inventor

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RNA提取常见问题分析

点击： 作者：51protocol收集 来源： 时间： 2007-08-17 　本站论坛

◆ 柱子堵塞：

1. 裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量，增加裂解液用量，增加匀浆和裂解
时间。
2. 处理样品太多。

◆ 得率低：

1. 裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量，增加裂解液用量，增加匀浆和裂解
时间。
2. 处理样品太多。请参考最大处理量。
3. RNA仍在柱上未洗出。再次洗脱，加入RNase-Free 水后，放置几分钟离心。
4. 洗出液中有酒精。漂洗后应再次离心，尽量去除漂洗液。
5. 未除净细胞培养液。收集细胞时，请注意尽量去除培养液。
6. 使用RNAstore保存的细胞:未有效离心。RNAlater密度大于一般的细胞培养
液，离心时应加大离心力，可以3000×g离心。

◆ A260/A280比值低：

洗脱时不使用RNase-Free 水，使用10 mM Tris.Hcl, pH 8.5作为洗脱液。

◆ RNA降解：

1. 提取的材料不新鲜。新鲜组织取得后应立即置于液氮中或立即放入RNAstore试
剂中，以保证提取效果。
2. 处理样品量过大。
3. 污染了RNase。虽然试剂盒中提供的缓冲液都不含RNase，但使用过程中很
容易污染RNase，应小心操作。

◆ DNA污染：

1. 处理样品量过大。
2. 有些样品本身DNA含量即较高，可使用DNase处理。得到的RNA溶液可加入
DNase处理，处理后直接用于后续实验，也可用本试剂盒再进行一次纯化。

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