蛋白酶-热酚法本方法适合于病毒RNA的提取
试验试剂:1、 蛋白酶K(终浓度50ug/ml)
2、 2×缓冲液:1%SDS? 20mMTris-HCL (pH 7.6)? 0.2MnaCL
试验步骤:
1、 提纯病毒液中加入等体积缓冲液、蛋白酶K,37℃40-50分钟。
2、 加入等体积65℃预热的酚溶液,轻徭,在65℃保温5分钟后再轻徭。
3、 离心,取上清,氯仿抽提一次。
4、 取上层水相,加1/10倍体积的3M乙酸钠(pH5.2)及2倍体积的乙醇,-20℃放置1小时,5000g离心(10000g,10min)。
5、 70%乙醇洗沉淀一次。真空干燥。
6、 RNA溶解液溶解沉淀,得RNA,分装,于-70℃保存。
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