28. 将加过样经震荡后的Pico芯片放置入分析仪内,5分钟之内开始运行芯片电泳。
29.在芯片界面选择Pico RNA芯片,点击RNA→真核生物RNA Pico→开始。
30. 输入文件名和相应的样品编号后,点击OK(注意:7分半钟以后才能看到微胶结果开始出现)。
31. 开始电泳后,在软件中找到样品名列,输入各个相应的样品名。
32. 电泳结束后,弃去样品芯片,换入DEPC水清洗芯片清洗电极。
33. DEPC水清洗共30秒钟。
34. 打开分析仪,移去DEPC清洗芯片,等电极水分蒸发30秒钟后关闭分析仪。
35. 弃去两个清洗电极芯片中的液体后存放备下次用(清洗芯片应用12-13次后应更换)。
36. 保存结果并打印。
实验心得:这是个非常烧钱的实验。该实验所取得的组织内的同一类细胞纯度非常高。保证实验进行的最重要的条件是起始组织标本的质量,标本的质量越好,RNA的质量能有保证。RNA质量通过在微胶上的28S和18S两条带的形状和两者的比值来判断。一般来说只要电泳上可见28S和18S两条带,RNA进行下游的实验都没有问题。我所做的近70例标本的RNA浓度都在1-几十ng/μL不等,最低的浓度为600pg/μL;最后的RNA总体积为18μL左右。
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