| RNAi常见问题及问答（FAQs） | | 点击： 作者：51protocol收集 来源： 时间： 2007-08-16 本站论坛 |
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有关定制RNA Oligos 的问题
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Invitrogen公司的RNA寡核苷酸合成使用什么化学方法？
除了在核糖2羟基增加可一个保护基团外，RNA合成的化学方法与DNA合成的化学方法相同。这个位置通过甲硅烷基（silyl groups）保护，在整个合成过程中保持稳定。糖和碱基剩余的位置都使用与DNA相同的方式进行保护。
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RNA寡核苷酸使用什么纯化方法？
RNA能够通过分析HPLC纯化。同时, 可以定制基本的脱盐纯化的RNA。我们不提供额外的双链退火后纯化。
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脱盐和HPLC纯化的区别是什么？
HPLC纯化意味着oligo被纯化为全长，脱盐意味着从oligo中去除副产品。不涉及无效序列的纯化。
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合成RNA寡核苷酸的最大长度是多少？
目前RNA寡核苷酸的最大长度是50碱基。
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RNA寡核苷酸配对效率是多少？
98.5％
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合成RNA寡核苷酸使用哪一种质量控制？
通过三苯基分析（trityl analysis）监测合成，通过质谱（mass spectroscopy）进行最终检验，以进一步确保质量。
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提供合成RNA寡核苷酸的规模多大？我可以收到多大量的RNA？
提供合成规模是50nmol和200nmole。如果合成规模是0.2 mol，最终的产量并不是200nmole。保证产量为：单链RNA规格
| 规 模 |
脱 盐 |
HPLC |
| 50 nmole |
5 OD’s |
1 OD |
| 200 nmole |
20 OD’s |
3 OD’s |
| 规 模 |
脱 盐 |
HPLC |
| 50 nmole |
2 OD’s |
1 OD |
| 200 nmole |
8 OD’s |
3 OD’s |
| 规 模 |
脱 盐 |
HPLC |
| 50 nmole |
20 nmole |
2 nmoles |
| 200 nmole |
80 nmole |
14 nmoles |
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收到何种形式的RNA寡核苷酸？
冻干（Lyophilized）。
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如何确定已经RNA收到的量？
对于单链RNA，产品文件包括产品的质量、摩尔数和OD值。对于双链RNA，有标准发送产品量（参看规格）,并且被列在管上，COA仍将提供单链的详细情况。
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RNA可以用来进行何种修饰？
5’磷酸，5’生物素， 5’荧光素 注：只能得到脱盐的5’磷酸，5’生物素
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能够获得在3’末端带有2个脱氧T的RNA寡核苷酸吗？
可以。只要简单地在要求序列中包括TT
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如何贮存RNA寡核苷酸？
最好在-20℃或者以下以冻干形式贮存。
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RNA的稳定性如何？
冻干形式的RNA可以在-20℃下贮存6个月
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应该使用什么溶剂溶解RNA，水还是缓冲液？
推荐使用1xTE缓冲液（在无RNase的条件下配制 10 mM TrisCl, pH7.5, 0.1 mM EDTA）溶解单链RNA，这将缓冲pH和鳌合金属离子，减少RNA的降解。也可以使用无RNase水，双链的RNA冻干自10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 20 mM NaCl, 1 mM EDTA，再次悬浮在适量的水中，RNA浓度到20μm，将恢复到相同的缓冲液。
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