| 原位杂交1969年美国耶鲁大学Gall和Pardue首先创立的,他们用爪蟾核糖体基因探针与其卵母细胞杂交,确定该基因定位于卵母细胞的核仁中.与此同时,BuongiornoNardelli和Amaldi,John及其同事等相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织的基因定位.Orth(1970)应用3H标记的兔乳头状瘤病毒cRNA探针与兔乳头状瘤组织的冰冻切片进行杂交,首次用原位杂交技术检出了病毒DNA在细胞中的定位.由于同位素标记探针具有放射性既污染环境,又对人体有害,且受半衰期限制等特点,因此研究用非放射性的标记物标记核酸探针进行原位杂交,引起了许多学者的重视和探索.Bauman(1981)等首先应用荧光素标记cRNA探针做原位杂交,然后用荧光显微镜观察获得成功.Shroyer(1982)报道用2,4二硝基苯甲醛(DNP)标记DNA探针,使该DNA探针具有抗原性,然后用兔抗DNP的酶标抗体来识别杂交后的探针,最后经免疫过氧化物酶组织化学的方法显示杂交
信号.Brigat(1983)首先建立生物素标记的探针在组织切片上检出了病毒DNA,通过生物素与抗生物素结合,过氧化物酶抗过氧化物酶显示系统显示病毒DNA在细胞中的定位,生物素标记探针技术目前已被广泛应用,特别是在病毒学和病理学的临床诊断中.Boeringer Mannhem Biochemisca于1987年将地高辛标记的有关试剂及药盒投放市场,和其它非放射性标记物一样,地高辛较放射性标记系统安全,方便,省时间.同时在敏感性和质量控制方面比生物素标记技术要优越,地高辛标记法显示的颜色为紫蓝色(标记碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶显色系统),有较好的反差背景,更有利于与免疫组织化学相结合,同时可以检测基因表达.核酸探针根据标记方法的不同可粗略分为放射性探针和非放射性探针两类.根据探针的核酸
性质不同又可分为DNA探针,RNA探针,cDNA探针,cRNA探针和寡核甘酸探针等.DNA探针还有单链DNA(Single stranded,ssDNA)和双链DNA(Double stranded,dsDNA)之分.所以原位杂交可分为DNADNA,cDNARNA,RNARNA和寡核苷酸探针与DNA或RNA等杂交方式.原位杂交技术在生命科学的研究中可视为一顶革命性的技术.它使我们的研究从器官,组织
和细胞水平走向分子水平.为各个学科的研究带来突破性的进展.
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