用寡核苷酸探针检测组织切片中的RNA原位杂交- 点击： 作者： 来源： 日期：2007-04-04 本站论坛
链菌素抗生物素-碱性磷酸酶)抗体30μl(1μg/ml),置37℃ 温盒内1小时.
3. Buffer B PH9.5(0.1mol/L Tris,1mol/L NaCl,5mmol/L MgCl2)冲洗,漂洗各3×5 min.
4. Buffer C PH9.5(0.1mol/L Tris,0.1mol/L NaCl,5mmol/L MgCl2)冲洗,漂洗各3×5
min.
5. 每张切片滴加50-100μl显色液(1 ml Buffer C PH9.5内含0.33mgNBT+0.16mg BCIP,1mmol/L 左旋咪唑在黑暗条件下显色20-40min,显微镜下控制效果.ddH2O中止反应.
6. 用核固红复染1-3min,次日在在37℃ 恒温箱内干燥切片15min后,单张切片快速经二甲
苯,中性树胶封片.
(八)阳性信号的评定
原位杂交的阳性信号位于浆内, 经NBT/BCIP显色,阳性信号为蓝色,呈细颗粒状.信号越强
,颜色越深,呈蓝紫色和紫黑色.阴性对照片内无阳性信号检出.原位杂交的阳性等级按以
下方法计算:
1. 阳性细胞数:阳性细胞≤10%,≤30%,≤70% 和>70%分别计1,2,3和4分.
2. 阳性着色强度:杂交信号强度可分为弱,中,强三级分别计1,2和3分,上述两种计分相加, 1-3分者为阴性, 4-5分者为阳性, 6-7分者为强阳性
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