1.培养细胞或离体细胞的裂解物 细胞裂解步骤:收集细胞,离心后,用200µl溶细胞缓冲液重新悬浮,室温下作用30min。
2.培养细胞的上清液
3.血浆(血清)
(四)操作方法
1.取样品离心后(1 000r/min,10min),吸取20µl上清液,加入链霉亲合素包被的培养板孔中。
2.另加入80µl免疫反应试剂 含抗-DNA-POD、抗组蛋白-生物素及温育缓冲液(按1︰1︰18混合),室温下孵育2h(置摇床上,250r/min)。
3.取上清,用300µl温育缓冲液洗涤3次,小心移去洗涤液。
4.加入100µl底物缓冲液,室温下孵育使颜色变化至适合(置摇床上)。
5.尽快作比色分析(10min~20min内),用底物缓冲液作空白对照,以波长405nm,参考波长492nm进行检测。
(五)结果判定
按下列公式计算细胞释放的单/低聚核小体片段的特别聚集值:
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