http://www.jlau.edu.cn/jiaowu/jpk/jing/mianyijishuquanshu/25.doc (一) 原理 细胞凋亡的发生,是由于钙 - 镁依赖性核酸酶进入核小体间切割 DNA , 产生 180bp ~ 200bp 或其倍数的核小体片段。而核小体由于与组蛋白 H2A 、 H2B 、 H3 和 H4 形成紧密复合物而不被核
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  • ELISA法检测细胞凋亡

  • 点击:    作者:51protocol收集   来源: 日期:2007-04-28    本站论坛
1.培养细胞或离体细胞的裂解物 细胞裂解步骤:收集细胞,离心后,用200µl溶细胞缓冲液重新悬浮,室温下作用30min

2.培养细胞的上清液

3.血浆(血清)

(四)操作方法

1.取样品离心后(1 000r/min,10min,吸取20µl上清液,加入链霉亲合素包被的培养板孔中。

2.另加入80µl免疫反应试剂 含抗-DNAPOD、抗组蛋白-生物素及温育缓冲液(按1118混合),室温下孵育2h(置摇床上,250r/min)。

3.取上清,用300µl温育缓冲液洗涤3次,小心移去洗涤液。

4.加入100µl底物缓冲液,室温下孵育使颜色变化至适合(置摇床上)。

5.尽快作比色分析(10min20min内),用底物缓冲液作空白对照,以波长405nm,参考波长492nm进行检测。

(五)结果判定

按下列公式计算细胞释放的单/低聚核小体片段的特别聚集值:


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