细胞生长检测2：MTT检测法

MTT检测法

1．取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2×10⁴～10×10⁴靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％ CO₂的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步）

2．用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子标准品，根据情况2～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品和待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个：3个阳性对照孔，每孔加0.1ml含大剂量细胞因子的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培养液。在37℃ 5％ CO₂的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24～48小时或预定的时间。

3．吸去培养液，用PBS洗涤一次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前离心培养板）。

4．每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO₂的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4～6小时。

5．每孔加0.1ml酸化异丙醇，也可用含10％ SDS的10mmol/L HCl代替酸化异丙醇，在振荡器上振荡混匀，让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长570nm，参考波长630nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。

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