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原代培养经验总结

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-10-29 　本站论坛

1、组织块煎成约1mm大小，可能觉得有困难，可以用手术刀，将组织置于平皿中切成小碎片。 2、先用培养基润湿六孔扳，然后保留500ul培养基，将组织块贴上去，24小时后更换培养基，一定不要使组织块漂起来，如有，应吸弃。 3、一般三天之内长出成纤维形状的细胞，约7-14天左右可以长满，可以传代，可以按1：2传，若心里没底，就按1：1传，多传几次后再按1：2传。 4、原代细胞建议用20%的血清，DMEM可能比1640好，不过我用的是20%的1640。 5、细胞消化脱壁非常快，但是细胞间分散很不好，因此可以等待5分钟，待细胞能吹散后不倒掉胰酶，直接在胰酶中吹打，然后加培养基终止消化，离心去除胰酶再传代。 6、原代细胞培养应注意细胞密度，细胞密度过低细胞将不生长。 7、培养基最好用新鲜配置的培养基，放置时间长的培养基应添加谷氨酰胺。

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