在基因功能研究过程中,常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达( transient expression ),以流式细胞仪检测细胞周期的变化,观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同,转基因的效率也不同,往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因
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  • 表达EGFP的质粒和目的基因共转染用于检测目的基因对细胞周期的影响

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-12-17    本站论坛
区分转基因和未转基因细胞。我们采用以下几种表达绿色荧光蛋白的载体:pBB14pCMVEGFPspectrinpEGFPN-1对这种方法进行了评价。

1 材料和方法

1.1 细胞和基因转染

293细胞和NIH3T3细胞以含10%小牛血清的DMEM培养基常规培养。细胞转染采用LipofectamineTM(Life Technologies)试剂盒,转染方法参照试剂盒说明书。细胞生长至60-80%汇片时进行转染,以pSP72质粒(未克隆入外源基因)作为目的基因,目的基因质粒和表达GFP的质粒的用量比是101。转基因后,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,在转基因后48小时,收集细胞进行检测。

1.2 质粒

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