pSP72质粒购自Promega公司。pEGFPN-1购自Clontech公司,pBB14、pCMVEGFPspectrin、均由Kalejta RF惠赠。所有表达绿色荧光蛋白的表达载体所采用的绿色荧光蛋白均是经过筛选的适合流式标记过程的突变体。pBB14质粒表达伪狂犬病毒野生型蛋白Us9和EGFP的融和蛋白(Us9-EGFP),由于含有Us9蛋白,可以定位表达于胞浆内膜、高尔基体、胞浆囊泡等部位[3,4]。pCMVEGFPspectrin基因内含有人定形素(spectrin)的PH(Pleckstrin Homology)结构域,可以使GFP定位表达于胞浆内的膜上。
1.3 细胞处理和流式细胞仪检测
1.3.1 观察75%乙醇固定对细胞绿色荧光蛋白的影响。在转基因后48小时,以0.25%胰酶消化处理细胞,离心收集细胞后,以PBS重悬细胞,浓度为10
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