6个/ml。细胞分为两份,一份不处理留作对照(对照管),一份(固定管)加入两倍体积在-
20℃预冷的75%乙醇固定细胞1小时,PBS洗涤细胞一次后流式细胞仪(FACSCalibur,Becton-Dickinson公司)检测,以CellQuest软件获取、分析细胞。收集细胞时GFP检测采用FL1通道(530/30nm),FL1通道采用对数值。以FL1直方图分析GFP阳性细胞
。
1.3.2 pSP72质粒和绿色荧光蛋白共转后细胞周期的检测。在转基因后48小时,以胰酶消化处理细胞,离心收集细胞后,以PBS重悬细胞,浓度为106个/ml。加入两倍体积在-20℃预冷的75%乙醇固定细胞1小时,以PBS洗涤细胞一次。加入含有50μg/ml的PI(碘化吡啶)和100μg/ml的无DNA酶污染的RNA酶(RNase A)PBS染色液,置
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