在基因功能研究过程中,常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达( transient expression ),以流式细胞仪检测细胞周期的变化,观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同,转基因的效率也不同,往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因
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  • 表达EGFP的质粒和目的基因共转染用于检测目的基因对细胞周期的影响

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-12-17    本站论坛
6个/ml。细胞分为两份,一份不处理留作对照(对照管),一份(固定管)加入两倍体积在-20预冷的75%乙醇固定细胞1小时,PBS洗涤细胞一次后流式细胞仪(FACSCalibur,Becton-Dickinson公司)检测,以CellQuest软件获取、分析细胞。收集细胞时GFP检测采用FL1通道(530/30nm),FL1通道采用对数值。以FL1直方图分析GFP阳性细胞

1.3.2  pSP72质粒和绿色荧光蛋白共转后细胞周期的检测。在转基因后48小时,以胰酶消化处理细胞,离心收集细胞后,以PBS重悬细胞,浓度为106个/ml。加入两倍体积在-20预冷的75%乙醇固定细胞1小时,以PBS洗涤细胞一次。加入含有50μg/mlPI碘化吡啶100μg/ml的无DNA酶污染的RNARNase APBS染色液,置

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