在基因功能研究过程中,常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达( transient expression ),以流式细胞仪检测细胞周期的变化,观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同,转基因的效率也不同,往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因
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  • 表达EGFP的质粒和目的基因共转染用于检测目的基因对细胞周期的影响

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-12-17    本站论坛
GFP作为指示蛋白,均可以考虑采用含有膜定位信号的GFP,这样在研究转基因细胞时,凡是涉及细胞固定的方法,如:流式细胞仪检测细胞周期、流式细胞仪检测细胞内蛋白表达、免疫组化检测细胞内蛋白表达均可较好的防治GFP的泄漏,从而可以有效的研究目的基因阳性的细胞。

 

4 参考文献

1.          Jiang W, Hunter T. Analysis of cell-cycle profiles in transfected cells using a membrane-targeted GFP. Biotechniques 1998 Mar;24(3):349-50, 352, 354

2.          Lamm GM, Steinlein P, Cotten M, et al. A rapid, quantitative and inexpensive method for detecting apoptosis by flow cytometry in transiently transfected cells. Nucleic Acids Res 1997 Dec 1;25(23):4855-7

3.          Kalejta RF, Shenk T, Beavis AJ. Use of a membrane-localized green fluorescent protein allows simultaneous identification of transfected cells and cell cycle analysis by flow cytometry. Cytometry 1997 Dec 1;29(4):286-91

4.          Kalejta RF, Brideau AD, Banfield BW, et al. An integral membrane green fluorescent protein marker, Us9-GFP, is quantitatively retained in cells during propidium iodide-based cell cycle analysis by flow cytometry. Exp Cell Res 1999 Apr 10;248(1):322-8

5.          Schimenti KJ, Jacobberger JW. Fixation of mammalian cells for flow cytometric evaluation of DNA content and nuclear immunofluorescence. Cytometry 1992;13(1):48-59


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