Escherichia coli的高密度培养大多采用分批补料技术，分批补料技术（fed-batch culture）是指在微生物分批发酵中间歇或连续补加一定物料的技术。补料的方式主要参看表1.3。其中，恒速流加是指以恒定的速率补加营养物质，在培养前期，菌体生长迅速，随着菌量的增加和代谢产物的积累，比生长速率逐渐下降，但菌体总量在发酵过程中还是线形增加的。指数流加是对变速流加的改进，根据菌体在指数生长期内菌体数目指数增加，通过微机控制，指数流加营养物质，使基质浓度保持在较低水平，有效的抑制了副产物的积累，提高了外源蛋白的表达效率。
表1.3 基因工程菌Escherichia coli高密度补料分批培养流加策略
Table 1.3 Fed-batch feeding strategies in HCDC for engineering E.coli
非反馈补料策略
恒速补料 预先设定的恒定的营养流加速率，细菌的比生长速率逐渐下降，菌体密度呈线性增加
变速补料 在培养过程中流加速率不断增加（剃度、阶段、线性等），细菌比生长速率在不断改变
指数补料 流加速度呈指数增加，比生长速率为恒定值，菌体密度呈指数增加
反馈补料
间接反馈控制
pH-stat值法 通过pH的变化，调节流加葡萄糖速度，节pH为恒定值
DO-stat法 控制溶解氧、搅拌转速及补料速度，维持恒定的溶解氧，减少有机酸的生成
菌体浓度反馈 通过检测菌体的浓度，拟合营养的利用情况，调整碳源的加入量
CO2释放速率（CER）法 通过检测CO2的释放率（CER），估计碳
源的利用情况，控制流加
直接反馈控制
底物控制法 在线检测葡萄糖或甘油浓度控制碳源浓度
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