细菌感染的血清学试验
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细菌感染的血清学试验

点击:   作者:   来源:  时间: 1970-01-01  本站论坛

血清学试验指在体外用已知抗体(或抗原)检测抗原(或抗体),是临床细菌性疾病诊断和病原菌鉴定的重要手段之一。血清学试验可分为血清学鉴定和血清学诊断两部分。用已知抗体(即含特异抗体的免疫血清或单克隆抗体等)检测标本中或分离培养物中未知细菌的种、型或细菌抗原,称为血清学鉴定;而用已知细菌或特异性抗原检测患者血清中有无相应抗体及其效价的动态变化,作为某些感染性疾病的辅助诊断,称为血清学诊断。
一、血清学鉴定
(一)玻片凝集试验
用于鉴定细菌的诊断血清有以下几类:
l、多价诊断血清:即混合诊断血清,血清中含有两种以上细菌的相应抗体。一般用于细菌定属或群。
2、单价诊断血清:仅含一种(或型)细菌的相应抗体。可用于细菌的定种(或型)。
3、因子诊断血清:仅含一种细菌的型特异性抗体的诊断血清称为因子血清。可用于细菌分型。
(二)协同凝集试验
见免疫学实验一(P.9)。此方法已用于链球菌、脑膜炎奈瑟菌、沙门菌、志贺菌等的鉴定或分群、分型等。亦可用于测定临床标本中的细菌抗原或可溶性代谢产物如细菌外毒素。
二、血清学诊断
常用的细菌性感染的血清学诊断种类见表6-1。
(一)肥达试验(Widal Test)
用已知伤寒沙门菌菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原,甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌(乙型副伤寒沙门菌)和希氏沙门菌(丙型副伤寒沙门菌)的H抗原与病人血清作试管凝集试验,测定病人血清中相应抗体及其效价,以辅助诊断伤寒和副伤寒。
【材料】待检血清、伤寒沙门菌“H”、“O”菌液、甲、乙型副伤寒沙
门菌“H”菌液、小试管、吸管、生理盐水、水浴箱等。
表6-1 细菌性感染的血清学诊断种类(举例)

【方法】
1、按下图所示取28支试管排成4排,每排 7支,并分别标明号码。
“H” → ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦
“O” → ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦
“A” → ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦
“B” → ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦
2、另取试管一支,先将病人血清做1:10稀释(0.9ml生理盐水 0.1ml病人血清,混匀后即成)。
3、每桌四人,各做一排。
表6-2肥达试验操作表



4、在每排各管中加入生理盐水0.5ml。
5、分别取1:10稀释的病人血清0.5ml加入至每排第一管中,混匀;然后自每排第一管吸取0.5ml至每排第二管,混匀;再自每排第二管吸取0.5ml至每排第三管,混匀;……按此法依次稀释至每排第6管,弃去0.5ml,每排第7管不加血清,作为对照。
6、加菌液:第一排各管加伤寒沙门菌“H”菌液0.5ml,第二排各管加伤寒沙门菌“O”菌液0.5ml;第三排各管加甲型副伤寒沙门菌“H”菌液0.5ml;第四排各管加乙型副伤寒沙门菌“H”菌液0.5ml。
7、摇匀后,置37℃水浴箱过夜,次日观察结果。
【结果】
1、结果判定:
(1)先观察盐水对照管,对照管无凝集现象时,再依次观察试验管。
(2)“O”菌液凝集呈颗粒状沉于管底,轻摇不易飘起。“H”菌液凝集呈棉絮状,轻摇即升起,容易摇碎。
(3)凝集程度:以“ ”多少表示。
A、“ ”—细菌全部凝集。管内液体清澈透明,菌体大片凝集沉于管底呈伞状。
B、“ ”—细菌大部分凝集。管内液体接近透明,菌体凝集稍小沉于管底呈伞状。
C、“ ”—细菌部分凝集。管内液体半澄清,菌体凝集物细小,仍呈明显的伞状沉淀。
D、“ ”—少部分细菌凝集。管内液体较混浊,管底沉淀物呈圆形,边缘有少部分细菌凝集。
E、“-”—不凝集。管内液体混浊,管底沉淀物呈圆形,边缘整齐。
(4)凝集效价:
以出现“ ”凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价。
2、结果报告:
按上面所述判定凝集效价的方法,分别报告伤寒沙门菌H抗体(TH)、伤寒沙门菌O抗体(TO)、甲型副伤寒沙门菌H抗体(PA)及乙型副伤寒沙门菌H抗体(PB)的效价,如果第一管无凝集现象应报“﹤1:40”,第六管仍显“ ”及以上凝集者就报“﹥1:1280”。
举例如下表。

1
140

2
180

3
1160

4
1320

5
1640

6
11280

7
对照

效价
判定


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