标本中未知细菌的分离和鉴定

将致病菌与诊断血请作玻片凝集→出报告

从患者粪便或肛门拭子中分离病原菌。

(1)标本：患者肛拭子。

(2)培养基：伊红美蓝琼脂平板、双糖铁培养基、蛋白胨水、葡、乳、麦、甘、蔗单糖管及醋酸铅、尿素培养基。

(3)吲哚试剂、沙门氏菌多价诊断血清、痢疾杆菌多价诊断血清、生理盐水、玻片。

方  法                     肛拭子

↓

伊红美蓝琼脂平板

↓

双糖铁培养基

↓        ↓

         多价诊断血清凝集试验      可疑菌落做生化反应

             （初步鉴定）

(1)取标本拭子涂布伊红美蓝琼脂平板上，再以灭菌接种环划线分离，置37℃培养。标本置4℃冰箱保存，待报告发出后再废弃。

(2)取伊红美蓝琼脂平板观察有无半透明、较小的可疑菌落，挑选单个可疑菌落接种于半固体双糖铁培养基上(每一标本应接种1支～2支双糖铁培养基)。

(3)观察细菌在双糖铁培养基上生长情况

①葡萄糖产酸产气、乳糖分解、动力有或无者，初步鉴定为大肠杆菌。

②葡萄糖及乳糖均不分解而有动力者，初步鉴定为粪产硷杆菌。

③葡萄糖产酸产气、乳糖不分解、没有动力者，初步鉴定为副大肠杆菌。

如属上述三种情况，不必再继续鉴定。

④葡萄糖产酸、产气或不产气，乳糖不分解、动力为阳性者，可能是沙门菌，可用伤寒、副伤寒诊断血清作玻片凝集试验,凝集则初步鉴定为沙门菌。如必要时再作进一步鉴别，即将双糖铁培养基上之细菌接种于葡萄糖、麦芽糠、乳糖、甘露酵、蔗糖、阿拉伯胶糖、木胶糖、鼠李糖、糖、卫予醇发酵管、蛋白胨水、醋酸铅培养基、尿素培养基，经37℃培养后，根据该菌的生化反应结果，再与有关的“O”因子血清作玻片凝集定组，最后以“H”因子血清作玻片凝集定型。

⑤葡萄糖产酸不产气、乳糖不分解、无动力时可能为痢疾杆菌，自双糖铁培养基斜面上取菌分别与志贺痢疾杆菌诊断血清、福氏痢疾杆菌多价诊断血清、鲍氏痢疾杆菌多价诊断血清、宋内痢疾杆菌诊断血清作玻片凝集，以定菌群；如必要时可分别用因子血清定菌型，也可以生化反应（甘露醇、乳糖、卫予醇、山梨醇、蛋白胨水）结果证实之。