1、微载体悬浮培养细胞的病毒生产工艺
作者选VSV病毒来接种经微载体培养的敏感细胞,病毒的效价测定用A549细胞(也可用Wish或Hep-2细胞或鸡胚纤维母细胞测TCID50),病毒的效价为6 Log TCID50/m L,用鸡胚细胞空斑法测定一般为107Pfu/mL。
①VSV在方瓶贴壁细胞中的增殖(100mL方瓶,10mL培养基)待BHK21、BHK13、CHO-K1细胞长满单层,弃上清加入10-2VSV病毒悬液0.2ml,37℃吸附1小时,加病毒维持液培养20小时,于-30℃冻存,待测效价。
②VSV在微载体悬液培养的细胞中增殖。
微载体培养的BHK21或BHK13、或CHO-K1细胞,
3~4天后细胞密度已达1×106细胞/mL
静置30分钟
尽量吸去原培养基
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