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物理、化学因素对微生物的影响

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-09-21 　本站论坛

物理、化学因素对微生物的影响
1 目的
1.1 观测氧气、温度、紫外线对微生物生长的影响
1.2 认识细菌芽孢对热、紫外线的抗力
2 原理
环境因素包括物理因素、化学因素和生物因素，不良的环境条件使微生物的生长受到抑制，甚至导致菌体的死亡。但是某些微生物产生的芽孢，对恶劣的环境条件有较强的抵抗能力。我们可以通过控制环境条件，使有害微生物的生长繁殖受到抑制，甚至被杀死；而对有益微生物，通过调节理化因素，使其得到良好的生长繁殖或产生有经济价值的代谢产物。
根据微生物对氧气的需求，可把微生物分为好氧菌、厌氧菌和兼性好氧菌。在鉴定细菌时，常以它们的好氧性作为指标。
温度是影响微生物生长的重要因素之一。根据微生物生长的最适温度范围，可分为高温菌、中温菌和低温菌，自然界中绝大部分微生物属于中温菌。
紫外线主要作用于细胞内的DNA，轻则使微生物发生突变，重则造成微生物死亡。紫外线照射的剂量与所用紫外光灯的功率(瓦数)、照射距离和照射时间有关。紫外线透过物质的能力弱，一层黑纸足以挡住紫外线的通过。
3 材料
3.1 菌种
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、粘质沙雷氏菌。
3.2 培养基
肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、麦芽汁葡萄糖培养基、察氏培养基。
3.3 其他物品
培养皿、无菌圆滤纸片、镊子、无菌水、无菌滴管、水浴锅、紫外线灯、黑纸、试管、接种针、温箱、刮铲、吸管、调温摇床、分光光度计。
（一）物理因素对微生物生长的影响
1 氧气对微生物生长的影响
1.1 流程
半固体培养基→接种→培养→观察比较→记录结果
1.2 步骤
1.2.1制备试管培养基
依据培养基配方制作肉膏蛋白胨半固体培养基，灭菌备用。
1.2.2接种与培养
取上述试管7支，用穿刺接种法分别接种枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和丙酮—丁醇梭菌，每种菌接种2支培养基试管，剩余一支作为空白对照。注意：穿刺接种到上述培养基中时，必须穿刺到管底。在37℃恒温箱中培养48h。
1.2.3观察结果
取出试验样品，观察各菌株在培养基中生长的部位。
2 温度对M的影响
2.1 流程
配培养液→选择温度→接种→培养→观察比较→记录结果
2.1 配制培养基
配制肉膏蛋白胨培养液试管（标记A）和豆芽汁葡萄糖培养液试管(标记B)，每管装5m1培养液，灭菌备用。
2.2 选择试验温度
取16支A培养液试管和8支B培养液试管，分别标明20℃、28℃、37℃和45℃四种温度，每种温度A培养液4管，B培养液2管。
2.3 接种与培养
A试管分别接入培养18—20h的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌菌液0.1m1，混匀；同样B试管接入培养18—20h的酿酒酵母菌液0.1m1，混匀；每个处理设2个重复，并进行标记。放在标记温度下振荡培养24小时。
2.4 观察结果
根据菌液的混浊度判断大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母菌生长繁殖的最适温度。
3微生物对高温的抵抗力
3.1 流程
培养液→接种→高温→培养→观察比较→记录结果
3.2 步骤
3.2.1选取培养基
取8支A培养液试管，按顺序从1到8编号。
3.2.2接种
其中4支(例如1、3、5、7)培养液试管中各接入培养48h的大肠杆菌的菌悬液0.1m1，其余4支(2、4、6、8) 培养液试管中各接入培养48h的枯草芽孢杆菌的菌悬液0.1m1，混匀。
3.2.3 高温水浴
将8支已接种的培养液试管同时放入100℃水浴中，10min后取出1至4号管，再过10min后，取出5至8号管。各管取出后立即用冷水或冷却。
3.2.4 培养
将各管置于其最适温度的培养箱中培养24h。
3.2.5 观察结果
依据菌株生长状况记录结果。以“一”表示不生长，“十’表示生长，并以“十”，“十十”，“十十十”表示不同生长量。
4紫外线对微生物的影响
4.1 流程
倒平板→涂布接种→紫外线处理→培养→观察比较→记录结果
4.2步骤
4.2.1标记培养基
取肉膏蛋白胨培养基平板3个，分别标明大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等试验菌的名称。
4.2.2接种
分别用无菌吸管取培养18—20h的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌菌液0.1m1(或2滴)，加在相应的平板上，再用无菌刮铲涂布均匀。
4.2.3紫外线处理
打开培养皿盖，用无菌黑纸遮盖部分平板，置于预热10一15min后的紫外灯下，紫外线照射20 min左右，取去黑纸，盖上皿盖。
4.2.4培养
在37℃培养箱中培养24h。
4.2.5观察结果
观察菌株分布状况，比较并记录三种菌对紫外线的抵抗能力。
（二）化学因素对微生物生长的影响
1 目的
1.1 了解化学因素对微生物生长的影响
1.2 掌握检测pH值、化学药剂对微生物生长影响的方法
2 原理
抑制或杀死微生物的化学因素种类极多，用途广泛，性质各异。其中表面消毒剂和化学药剂最为常见。表面消毒剂在极低浓度时，常常表现为对微生物细胞的刺激作用，随着浓度的逐渐增加，就相继出现抑菌和杀菌作用，对一切活细胞都表现活性。化学药剂主要包括一些抗代谢物，例如抗生素等。在微生物材料
3.1 菌种
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母菌、青霉菌、灰色链霉菌。
3.2 培养基
肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、豆芽汁葡萄糖培养基、察氏培养基。
3.3 药品
土霉素、新洁尔灭、复方新诺明、汞溴红(红药水)、结晶紫液(紫药水)。
3.4 其他物品
培养皿、无菌圆滤纸片、镊子、无菌水、无菌滴管、水浴锅、振荡器、游标尺、分光光度计。
4 流程
4.1化学药剂对微生物生长的影响
无菌培养皿→配菌悬液→滴加菌样→倒平板→药剂处理→培养→观察结果
4.2不同pH对微生物生长的影响
配培养基→配菌悬液→接种→培养→观察结果
5 步骤
5.1化学药剂对微生物生长的影响
5.1.1配制菌悬液
取培养18—20h的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌斜面各1支，分别加入4m1无菌水，用接种环将菌苔轻轻刮下、振荡，制成均匀的菌悬液，菌悬液浓度大约为106cfu/mL。
5.1.2滴加菌样
首先取3个无菌培养皿，每种试验菌一皿，在皿底写明菌名及测试药品名称。然后分别用无菌滴管加菌4滴(或0.2m1)菌液于相应的无菌培养皿中。
5.1.3制含菌平板
将融化并冷却至45—50℃的肉膏蛋白胨培养基倾入皿中约12ml～15m1，迅速与菌液混匀，冷凝备用。
5.1.4化学药剂处理
用镊子取分别浸泡在土霉素、复方新诺明、新诺尔灭、红汞和结晶紫药品溶液中的圆滤纸片各一张，置于同一含菌平板上。
5.1.5培养
片刻后，将平板倒置于37℃温箱中，培养24h。
5.1.6观察结果
观察抑菌圈，并记录抑菌圈的直径。
5.2不同pH对微生物生长的影响
5.2.1配制培养基
肉膏蛋白胨液体培养基（标记A），配制豆芽汁葡萄糖液体培养基（标记B），分别调pH至3、5、7、9和ll，每pH值培养基3管，每管盛培养液5m1，灭菌备用。
5.2.2配置菌悬液
取培养18—20 h的大肠杆菌、酿酒酵母菌斜面各1支，加入无菌水4ml，制成菌悬液。
5.2.3接种与培养
A培养基中接种大肠杆菌液l滴(或0.1毫升)、摇匀，置37℃温箱中培养24h。B培养基接种1滴(或o．1m1)，摇匀，置28℃温箱中培养24h。
5.2.4观察结果
根据菌液的混浊程度判定微生物在不同pH生长情况。
6 思考
6.1上述多个试验中，为什么选用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯革芽孢杆菌作为试验菌?
6.2说明青霉素和链霉素的作用原理。
6.3通过实验说明芽孢的存在对消毒灭菌有什么影响?

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