| 大肠菌群检验 | | 点击： 作者： 来源： 时间： 2007-09-21 本站论坛 |
|  | 大肠菌群（M.R.N.）检验
1 目的
了解大肠菌群在食品卫生检验中的意义
学习并掌握大肠菌群的检验方法
2 原理
大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。
食品中大肠菌群数系以每100g（或ml）检样内大肠菌群最近似数（the most probable number-简称MPN）表示。
3 材料
3.1 样品
乳、肉、禽蛋制品、饮料、糕点、发酵调味品或其他食品。
3.2 菌种
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）
产气肠杆菌（Enterobacteria aerogenes）
3.3 培养基及试剂
单料乳糖胆盐发酵管、双料乳糖胆盐发酵管、乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂（EMB）、革兰氏染色液。
3.4 其它
恒温箱、恒温水浴、药物天平、培养皿、载玻片等
4 流程
5 步骤
取样及稀释方法与菌落总数检验方法相同,做成1:10的均匀稀释液为检样。同一稀释度在做菌落总数的测定的同时接种乳糖胆盐发酵管，并且用大肠埃希氏菌、产气肠杆菌混合菌种作对照。
5.1 乳糖发酵试验
根据食品卫生要求或对检样污染程度的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳糖胆盐发酵管，同时用大肠埃希氏菌和产气肠杆菌混合菌种混合接种于1支作单料乳糖胆盐发酵管对照。置36%26#177;1℃温箱内,培养24%26#177;2小时,如所有发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则与对照的混合菌种一起按下列程序进行。
5.2 分离培养
将产气的发酵管分别在伊红美兰琼脂（EMB琼脂）平板上划线分离。然后置36%26#177;1℃温箱内，培养18～24小时后取出, 观察菌落形态,并作革兰氏染色和证实试验。
5.3 证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌落1～2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36%26#177;1℃温箱培养24%26#177;2小时,观察产气情况,凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可报告为大肠菌群阳 性.
5.4 报告
根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。
6 结果
6.1试验结果表
接种量 管号 发酵反
应结果 有无典
型菌落 革兰氏染色结果 复发酵反应结果 最后结论
+或-
1ml 1
2
3
0.1ml 1
2
3
0.01ml 1
2
3
5.2 结果报告
根据证实大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表(见附录)报告每100ml(克)大肠菌群的最可能数.
7 思考
1 大肠菌群检验中为什麽首先要用乳糖胆盐发酵管？
2 作空白对照为什么大肠菌群的检验要经过复发酵才能证实？
4 复发酵时为什么使用乳糖发酵管但不需加胆盐？
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