用ELISA法检测幽门螺杆菌抗体- 点击: 作者: 来源: 日期:2007-04-08 本站论坛
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2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
| 未吸收 |
1.588 |
1.230 |
1.220 |
1.555 |
1.420 |
1.384 |
1.354 |
1.266 |
| 吸收后 |
1.366 |
0.980 |
0.917 |
1.048 |
1.039 |
1.039 |
0.999 |
0.677 |
| 抑制结果 |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
从表1结果可知,阳生血清经吸收1次后,OD值均较吸收前下降,特别8号血清前后相比下降了50%,由此均显示特异吸收抑制试验阳性,证明该8份阳性血清的抗Hp抗体是特异的。为了探索所建立的ELISA间接法检测抗Hp抗体的敏感度,选择6份抗p阳性血清按上述实验条及方法进行ELISA检测,同时与试管凝集试验和显微凝集试验进行比较,结果见表2。
表2 ELISA测定Hp抗体敏感比较结果
| 吸收处理 |
6份抗Hp阳性血清测出的最终抗体滴度 |
| 1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
| ELISA |
>800 |
>800 |
>800 |
>800 |
>800 |
>800 |
>800 |
| 试管凝集 |
160 |
320 |
320 |
640 |
320 |
320 |
320 |
| 显微凝集 |
320 |
320 |
320 |
320 |
320 |
320 |
320 |
数字为稀释倍数的倒数
从表2结果表明,6份抗Hp抗体阳性血清用所建立的ELISA间接法测出的抗体效价均>1:800,试管凝集试验测出的抗Hp抗体效价为1:160~1:640,显微凝集试验测出的抗Hp抗体效价为1:160~1:320,显然ELISA法比后两者方法敏感的多。
批内误差 将4份阳性血清标本在同一块板上按上述方法重复进行9次ELISA试验,计算各份标本检测OD值结果的变异系数(表3)。
表3 4份阳性血清重复9次ELISA检测(x)
| 阳性血清号 |
| |
1 |
2 |
3 |
4 |
| x |
0.510 |
0.394 |
0.416 |
0.207 |
| SD |
0.028 |
0.032 |
0.030 |
0.014 |
| SV(%) |
5.6 |
8.1 |
7.19 |
6.57 |
从表3得知,批内误差范围是5.5%~8.1%,平均6.87%,显示按上述实验条件建立的检测Hp抗体的间接法ELISA的稳定性好,重复性佳。
批间误差 将5份阳生血清,按上述方法及实条件在1W内反复进行3次ELISA,计算各份标本检测OD值结果的变异系数(表4)。结果指出三批阳性标本的变异系数在0.74%~8.12%之间,平均4.67%,由此亦显示按上述实条件建立的检测Hp抗体的间接法ELISA重复性和稳定性均良好。
2.2 临床标本检测结果
将胃镜检查患者的血清以1:100稀释,用上述实验条件建立的ELISA间接法进行,Hp抗体(ELISA-HpAb)检测,同时将同一患者胃粘膜进行Hp分离培养(HpC)和Hp尿素酶测定(HpUT),以资比较(表5)。
表4 5份阳性血清标本进行ELISA的批间误差试验结果
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