| ELISA测定技术的发展和质量控制 | | 点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-08 本站论坛 |
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三、仪器的质量控制
随着全自动生化分析仪的不断更新发展，目前国内已有多家引进先进的自动化酶免疫分析仪来替代ELISA法的手工操作，使试验的特性更加全面规范化。
1、全自动酶免分析仪的特点
①、加液的精密度：
②、始终如一的洗涤：
③、环境控制：
④、QC特性/过程安全性
2、酶标仪的简易校准和质量控制
移液器
水浴箱
洗板机
酶标仪的简易校准和质量控制
滤光片波长精度检查
通道差和孔间差检测
零点漂移即仪器稳定性观察
精密度评价
线性测定
双波长测定评价
四、开展质量控制前的准备
检验工作的质量控制应包括实验室工作的全过程，只有建立在完善的 质量管理工作基础之上，才能对测定结果进行质量控制。没有健全的 实验室质量管理、质量体系，一切均在非控制之中，只靠一份质控血清，分析这份血清的质控结果是达不到质量保证的预期结果的，也不可能做好室内质控，作好质控图。
1、建立质量体系
建立质量管理，编制质量手册，健全质量体系，使实验室的工作有条不紊，从样品采集、运送、记录、检测方法的选择、试剂、仪器、人员素质、操作技术水平、计算、质控方法、报告填写、实验环境、工作量、相互协作等等，每一步骤都准确按质量手册的规程办，可预防差错，即使偶尔发现失控，就能容易地分析出产生变异的因素。
2、质控血清的制备
各实验室可以按美国CAP或国家检定新的标准建立起定值质控品
制备方法：
（1）收集血清
（2）灭活
（3）离心或过滤除去沉淀物
（4）稀释
（5）保存
（6）定期校正
HBsAg标准曲线图
3质控物定值的选择
室内质控点的选择，以需要设置质控的点，设置质控物进行质控为原则。
病毒性肝炎酶免疫检验中，有高值、中值、低值的质控物，我们认为其中以低值的质控物为最重要，设置临界于cutoff值（CO值）的低值弱阳性质控物是室内质控的关键。重点抓住低值弱阳性-临界值血清的室内质控检测，是室内质控精密度观测的最敏感的窗口，也是揭示试验成功与否的重要标志。
临界值血清是室内质控血清，不是判断阴、阳性的标准，判断样品不是判断阴、阳性结果的标准是以试剂盒说明书提供的cutoff值为标准。任何人不能随意更改试剂盒说明书中提供的判断阴、阳性结果的公式。
4、cut off (CO)值又称临界值或阳性与阴性界限值
CO 值计算实例：（以夹心法为例）
1）依据试剂盒说明书规定
S/N ≥2 .1 为阳性.（S:样品，N：阴性对照）
因为S ≥ N×2.1 判断为阳性,
所以S = N×2.1 为阴阳性结果分界点，即CO值.
CO (cut off) 值 = N×2.1
当S≥CO值时，判为阳性；S<CO值时，判为阴性
2）样品结果表示法：S/CO 值
S/CO = 样品A值÷ CO 值
当 S/CO ≥ 1时，判为阳性； S/CO <1 时判为阴性。
CO 值计算实例：ELISA-抗HBc（竞争抑制试验）
依据试剂盒说明书规定：
（1）S/N ≥ 2 .1 为阳性. （S: 样本 ，N：阴性对照）
所以 S ≤ N÷2.1 ， 判断为阳性,
当S = N÷2.1 为阴阳性结果分界点，即CO值.
CO (cut off) 值 = N÷2.1
当 S ≤ CO 值时，判为阳性；S >CO值时，判为阴性
（2）样品结果新表示法：S/CO 值
当 S/CO ≤ 1时，判为阳性；
， S/CO >1 时，判为阴性。
5、试剂盒的质检
每块版放置临界CO值血清做试剂盒质检是十分简便可行的事。
五、室内质控步骤
根据英国Whitehead的意见，室内质控分为以下几个阶段：
1、最佳条件下的变异(optimal condition variation,OCV)
2、常规条件下已知值质控血清的变异(routine condition variation-known,RCVK)
3、常规条件下未知值质控血清的变异(routine condition variation-unknown,RCVu)
4、病人结果的资料统计应用 (statistics use of patient’s results)
1、最佳条件下的质控血清变异测定
在本实验室最佳条件下（包括操作者、试剂、仪器等）检测质控血清20~30次，将测得结果计算，求出该组数据的均值（x）和标准差(s)表示该实验室的最佳条件下质控血清变异。
举例说明HBsAg-ELISA法检测时OCV的测定。
使用的质控血清HBsAg临界值血清。在实验室中选择素质最好、操作最熟练的技术员进行认真地专门测定，选用最佳的试剂盒，检测之前应将恒温箱、加样器等认真校正、调试，使用新的加样吸头等，即在最佳、最理想地条件下进行检测，测定阴性对照品和阳性对照品，质控血清做双测定，得出2个吸光值（A值）的均值。获得X1……X20.通过计算S/CO值计算，获20个S/CO值。这组数据举例见表2.1
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次数 |
质控血清1 |
阴性对照品 |
Cut-off值 |
S/CO值 |
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A值 |
A值 |
阴性A值X2.1 |
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1 |
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