蛋白质的定量测定（一）——双缩脲法- 点击： 作者： 来源： 日期：2007-10-15 本站论坛
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2.0
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4.0
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6.0
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8.0
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10.0
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蒸馏水/ml
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1.0
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0.8
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0.6
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0.4
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0.2
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0.0
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双缩脲试剂/ml
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4.0
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4.0
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4.0
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4.0
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4.0
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4.0
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充分混匀后，室温下（20—25℃）放置30min
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A540
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取两组测定的A540值的平均值，即A540为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
二、样品测定
取4支试管分成两组，按下表平行操作：
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0
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1
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血清稀释液/ml
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0.5
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蒸馏水/ml
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1.0
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0.5
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双缩脲试剂/ml
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4.0
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4.0
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充分混匀后，室温下（20—25℃）放置30min
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A540
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三、计算
取两组测定的平均值计算：
其中,Y为标准曲线查得蛋白质得浓度（mg/ml），N为稀释倍数，V为血清样品所取的体积（ml），c为样品原浓度（mg/ml）。
注意事项
（1）本实验方法测定范围1－10mg蛋白质。
（2）须于显色后30min内比色测定。30min后，可有雾状沉淀发生。各管由显色到比色的时间应尽可能一致。
（3）有大量脂肪性物质同时存在时，会产生浑浊的反应混合物，这时可用乙醇或石油醚使溶液澄清后离心，取上清液再测定。
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