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方法
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灵敏度
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时间
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原理
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干扰物质
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说明
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凯氏定氮法（Kjedahl法）
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灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为 ±2％
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费时
8～10小时
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将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定
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非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）
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用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长
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双缩脲法（Biuret法）
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灵敏度低
1～20mg
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中速
20~30分钟
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多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物
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硫酸铵；
Tris缓冲液；
某些氨基酸
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用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似
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紫外吸收法
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较为灵敏
50～100mg，比色杯的最小测量体积为0.1ml
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快速
5～10分钟
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蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收
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各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸
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用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正；不消耗样品，测定后样品仍能回收利用
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Folin－酚试剂法（Lowry法）
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灵敏度高
～5mg
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慢速
40～60分钟
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双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原
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硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇
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耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化; 标准曲线不是严格的直线形式，且专一性差
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考马斯亮蓝法(Bradford法)
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灵敏度更高
1～5mg,最小测量体积0.1ml
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快速
5～15分钟
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考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm
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强碱性缓冲液；TritonX-100;
SDS
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较好的方法；干扰物质少；颜色稳定； 颜色深浅随不同蛋白质变化; 标准曲线有轻微的非线性
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BCA法
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灵敏度非常高20～200mg,微量BCA为 0.5～10mg
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较快速40分钟内
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在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+
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螯合剂；略高浓度的还原剂
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抗干扰能力强，
蛋白不可逆的变性
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