4，同一个蛋白出现在不同的部位。在离子交换中可能是电荷分布不对称。上面的所有的还有一个可能就是柱子有问题，那我就不好说了。但是我用到的都是世界上最好的公司的预装柱，所以我就不考虑了。还有的情况是上面的1、4同时出现，那真是要把人气死！！！至于说拖尾，刺峰等等都很常见。而且首先大概就是考虑柱子效率下降了或者坏了。呵呵！！！
5、样品浓度多少才不算低？0.8mg/ml的蛋白质浓度算不算低。我不太想用透析袋浓缩，那样会丢失好多样品。想直接加样，洗脱。还有，上样体积问题？2.6*96cm 柱子，上100ml 的样品怎么样？最后一个问题，样品中含有少量edta会不会有影响？
1、如果是离子交换，上样浓度太大反而不好，这样子动态载量会减小；
2、如果是凝胶层析，上样浓度要尽量大些，道理和电泳一样，样品在跑的过程中不可避免地会被稀释，变得"broad"，杂质和目标蛋白的洗脱峰就有更多的部分重叠，影响纯度。
3、关于凝胶层析的上样量，通常是柱体积的2－5％，太多会影响分离效果。你的上样量显然太大了。在现有条件下，可以通过连续批次上样，即不等前次样品跑出柱子，就第二次上样，通常可以做到一个柱体积上两次样，这样子可以节省时间和试剂。但要具体摸索。
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