6、准备上柱的液体应进行过滤,至少是0.45micrometre。
7、至于测序,我想大概不到1mg 应该足够了。
8、关于纯化,首先要考虑的是你的目标:纯度、数量、速度、收率等等,再根据样品的具体情况,尤其是目标蛋白的性质,确定纯化策略。通常三步曲:capture、purification、polishing。第一步先从大量或复杂样品中将目标蛋白“抓出”,与主要杂质分离;再用高选择性的层析去除绝大部分杂质;最后精细纯化,提供纯度至设定目标。到实际工作中,不要死靠三步,也许一步也许四步或更多,具体情况具体分析。所谓“三步”只是一种思路而已。
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