7,8〕。对于蛋白质生物大分子的置换色谱来说,多离子型的置换剂与离子交换续料相结合是目前常用的分离方式。传统观点认为分子量相对大的聚电解质是较合适的置换剂,因为它们对固定相的结合比分离物更强,如羧甲基葡聚糖(CMD)、 M QNUD^!
硫酸葡聚糖、羧甲基淀粉(CMS)〔9〕、硫酸鱼精蛋、肝素、多硫酸戊聚糖(PPS)等。近期的研究表明,低分子量的化合物作为置换剂则更有优势,因为即使置换剂与蛋白质产物的峰有叠加,在后处理过程中,低分子量置换剂则较容易从目标产物中分离;同时,合成低分子量置换剂成本较低,色谱柱再生过程也比分子量大的置换剂快。
(2)固定相
理想的固定相应具备以下条件:样品及置换剂在固定相上应有较强的吸附作用,且吸附是可逆的;样品及置换剂在固定相上的吸附等温线应为Langmuir 型;样品各组分在固定相上的吸附能力应有较大差别,以保证置换色谱带的交叠部分尽可能小而获得良好的产率;有较好的化学稳定性,可适用于不同pH 值的缓冲液和有机溶剂;有较大的比表面及吸附容量;有较好的机械强度,而且容易再生。置换色谱中的环境不同,置换效果也不一样,即使是选用同样的硅胶,由于来源和制备方法上的差异也会影响置换效率。反相色谱中使用的烷基硅胶柱常被应用于置换色谱。同其它硅胶固定相相比,烷基硅胶柱由于柱容量低及非选择性吸附等缺点,很少被用于洗脱色谱,但它却可以用于置换色诺,并成功地分离了对映异构体。
1、问题:电渗纯化蛋白质,结果几乎没得到蛋白,请问哪位有高见 今夜纯化蛋白,本以为唾手可得,结果却大失所望....我用
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